Иммунологическая диагностика туберкулеза методом T-SPOT.TB

Универсальный альтернативный вариант иммунологического исследования in vitro диагностики туберкулезного процесса путем количественного определения мононуклеарных клеток периферической крови, продуцирующих ИФН-γ в ответ на присутствие белков CFP-10 и ESAT-6 M. tuberculosis.

Синонимы русские

Иммунологический тест на туберкулез.

Синонимы английские

Testing for tuberculosis infection.

Метод исследования

Прямая оценка функции Т-клеток ELISPOT.

Зарегистрирован в РФ в 2012 г. (рег. УД. № ФСЗ 2012/648).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Возбудителем туберкулёза является микобактерия туберкулеза (МБТ, палочка Коха, Mycobacterium tuberculosis) – высокоустойчивый микроорганизм. В настоящее время описано около 150 видов микобактерий, но клинически значимыми признаны М. tuberculosis (более 90 % всех случаев туберкулезной инфекции), М. bovis (5 %) и М. africanum (около 3 % –  главным образом среди населения стран тропической Африки).

Источником инфекции являются больные люди и животные. Наиболее распространен воздушно-капельный путь заражения, при котором возбудитель проникает в организм через верхние дыхательные пути, иногда через слизистые оболочки пищеварительного тракта или через поврежденную кожу.

Попадая в окружающую среду, возбудитель способен длительно сохраняться: в высохшей мокроте он выживают до 10 месяцев, на предметах, окружающих больного (белье, книги), –  более 3 месяцев, в воде –  более года, в почве –  до 6 месяцев.

В настоящее время описаны следующие варианты развития ситуации после проникновения МБТ в организм человека:^[1]

• полная элиминация (удаление) возбудителя из организма;
• развитие первичного туберкулеза (при быстром росте и размножении МБТ);
• инфицирование, или "латентная туберкулезная инфекция" (ЛТИ),^[2]  – состояние стойкого иммунного ответа на антигены МБТ при отсутствии клинических проявлений активной формы туберкулеза.

Присутствующий в организме возбудитель способен не только длительно бессимптомно персистировать в организме, но при определенных обстоятельствах (интенсивное размножение МБТ на фоне малоэффективного иммунитета и т.д.) реактивироваться и вызвать развитие заболевания. В настоящее время установлено, что с момента инфицирования МБТ в течение первого года заболевание развивается у 5 % инфицированных людей, в течение всей оставшейся жизни туберкулез развивается еще у 5 %, то есть пожизненный риск заболевания туберкулезом среди инфицированных составляет 10 %.

Вместе с тем наличие различных факторов может способствовать повышению риска развития локального туберкулеза: так, при ВИЧ-инфицировании ежегодный риск заболевания туберкулезом на фоне ЛТИ составляет 10 %, а пожизненный риск – 50 %.

Диагностика туберкулеза является комплексной и включает, согласно регламентирующим документам,^[3] аллергические внутрикожные пробы (реакция Манту и "Диаскинтест"), инструментальное обследование (ФЛГ, рентген) и лабораторные – направленные как на выявление и идентификацию возбудителя с определением спектра его чувствительности к препаратам этиотропной терапии, так и на изучение выраженности иммунологической реакции на патоген.

Одним из современных и высокоинформативных методов определения специфической иммунной реакции на МБТ, особенно при отсутствии или минимальных клинико-инструментальных признаках инфекции и сомнительных результатах общепринятых методов лабораторной диагностики туберкулеза, является тест T-SPOT.

Принцип метода

Исследование иммунного Т-клеточно-опосредованного ответа: количественное определение в крови эффекторных Т-клеток (CD4 и CD8), вырабатывающих ИФН-ɣ (гамма-интерферон), который продуцируется в ответ на стимуляцию специально подобранными антигенами ESAT-6 и CFP10. Эти белки входят в состав клинически значимых МБТ (М. tuberculosis, М. bovis, М. africanum) и отсутствуют у бактерий, используемых при производстве вакцины БЦЖ и у непатогенных для человека микобактерий.

Преимущества теста Т- SPOT:

• высокая специфичность и чувствительность метода (87-97 %);
• безопасность, отсутствие побочных реакций;
• отсутствие ложноположительных результатов;
• результат исследования не зависит от наличия вакцинации БЦЖ;
• не имеет противопоказаний и ограничений по времени проведения;
• позволяет диагностировать внелегочные формы туберкулеза;
• позволяет диагностировать инфекцию у пациентов с ВИЧ и низкими показателями уровня CD4.^[4]

Для чего используется исследование?

• Диагностика туберкулезной инфекции.

Когда назначается исследование?

• Пациентам, у которых в связи с основным заболеванием (эпилепсия, хронические заболевания в стадии обострения и др.) затруднено проведение внутрикожных тестов.
• При наличии в анамнезе пациента токсико-аллергических реакций на туберкулин.
• Детям, привитым БЦЖ, у которых выявлена ложноположительная реакция Манту, – до проведения инструментального обследования легких.^[5]
• По эпидемиологическим показаниям – пациентам, прибывшим из стран с высоким уровнем заболеваемости туберкулезом (Африка, Азия) и/или находившимся в контакте с лицами с диагностированным заболеванием.
• Пациентам с аутоиммунными и др. заболеваниями (силикоз), ведущими к снижению системного иммунитета.
• Пациентам, получающим системное лечение глюкокортикоидами или иммуносупрессивную терапию.
• Онкологическим пациентам, получающим лучевую и химиотерапию.
• Пациентам на диализе или готовящимся к трансплантации органов или переливанию крови.
• ВИЧ-инфицированным, особенно со снижением количества СD4-клеток.
• При подозрении на внелегочные формы туберкулеза.

Что означают результаты?

Референсные значения

Компоненты	Референсные значения
T-SPOT.TB	Отрицательный
Т-СПОТ антиген A (ESAT-6)	Менее или равный 4 – отрицательный; от 5 до 7 – пограничный, более или равный 8 – положительный
Т-СПОТ антиген B (ECFP-10)	Менее или равный 4 – отрицательный; от 5 до 7 – пограничный, более или равный 8 – положительный

ВАЖНО!

• Исследование позволяет провести косвенную диагностику наличия в организме возбудителя туберкулеза по интенсивности иммунологической реакции, но не дает возможность дифференцировать форму заболевания.
• Трактовку результатов исследования необходимо проводить только в комплексе с эпидемиологическими и клинико-инструментальными данными обследования пациента.

Отрицательный результат исследования не гарантирует отсутствия инфицирования. У пациентов, находившихся в контакте с инфицированными МБТ, результаты исследования могут быть отрицательными. Рекомендуется проведение повторного исследования через 6 недель после контакта либо при появлении клинических признаков или симптомов, свидетельствующих о возможном заражении.

Положительный результат исследования не свидетельствует об активной форме туберкулеза. Для подтверждения диагноза необходимо проведение других исследований, включая культуральные исследования мокроты, ПЦР, рентгенографическое исследование грудной клетки и др.

Пограничный результат свидетельствует о том, что образец крови содержит эффекторные Т-клетки, специфически сенсибилизированные к
M. tuberculosis, в количестве от 5 до 7. Целесообразно провести повторное исследование через 1–2 месяца. При повторном получении пограничного результата для уточнения иммунного статуса пациента по ТВ инфекции следует использовать другие методы обследования и/или данные эпиданамнеза.

Что может влиять на результат?

• Результат исследования может быть недостоверен в связи с высокой спонтанной продукцией ИФН-y или недостаточной функциональной активностью Т-лимфоцитов. В таком случае рекомендовано повторить исследование через 2-4 недели.
• Папула после Манту в редких случаях может влиять на результат, особенно усиливая пограничные результаты до слабых положительных значений или слабые положительные до просто положительных. Рекомендуется выдержать после снятия Манту хотя бы 72 часа. Если папула сильно выраженная, то лучше сделать перерыв в 1–2 недели, чтобы избежать ложноположительного результата.

Важные замечания

• Важно помнить, что Т-SPOT является способом количественной диагностики наличия в организме туберкулеза, но не дает возможности отличить активную форму туберкулеза от латентной.
• Тест имеет особое значение в диагностике туберкулеза у носителей ВИЧ. Вирус иммунодефицита поражает как раз те клетки, которые используются для диагностики в любом из IGRA-тестов, к которым относится и T-SPOT, т.е. клетки CD4. В ходе исследований обнаружилось, что даже на поздних стадиях развития ВИЧ, когда количество лимфоцитов CD4 уже не превышает 100 на мм,³ выявляемость туберкулеза при помощи Т-SPOT остается очень высокой.

Также рекомендуется

• Mycobacterium tuberculosis, антитела
• Mycobacterium tuberculosis, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Mycobacterium tuberculosis complex, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Определение неоптерина в сыворотке крови (диагностика туберкулеза и вирусных инфекций)

Кто назначает исследование?

Фтизиатр, терапевт, врач общей практики.

Литература

1) Выявление и диагностика туберкулеза у детей, поступающих и обучающихся в образовательных организациях. Клинические рекомендации МЗ РФ, М., 2017.

2) Руководство по ведению пациентов с латентной туберкулезной инфекцией. ВОЗ. Женева. 2015. 40 с.

3) Приказ МЗ РФ  России от 21.03.2003 года N 109 "О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации".

4) Official American Thoracic Society/Infectious Diseases Society of America/Centers for Disease Control and Prevention Clinical Practice Guidelines: Diagnosis of Tuberculosis in Adults and Children David M. Lewinsohn,  Michael K. Leonard,  Philip A. LoBue et al. Clin Infect Dis (2017) 64 (2): 111–115. DOI: https://doi.org/10.1093/cid/ciw778.

5) Выявление и диагностика туберкулеза у детей, поступающих и обучающихся в образовательных организациях. Клинические рекомендации МЗ РФ, М., 2017.

6) Mazurek GH, Jereb J, Vernon A, LoBue P, Goldberg S, Castro K; IGRA Expert Committee; Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Updated guidelines for using Interferon Gamma Release Assays to detect Mycobacterium tuberculosis infection – United States, 2010. MMWR Recomm Rep. 2010 Jun 25;59(RR-5):1–25.

7) Anochie PI, Onyeneke EC, Ogu AC, Onyeozirila AC, Aluru S, Onyejepu N, Zhang J, Efere L, Adetunji MA, Sánchez JG. Recent advances in the diagnosis of Mycobacterium tuberculosis. Germs. 2012 Sep 1;2(3):110-120. Review.

8) Diel R, Goletti D, Ferrara G, Bothamley G, Cirillo D, Kampmann B, Lange C, Losi M, Markova R, Migliori GB, Nienhaus A, Ruhwald M, Wagner D, Zellweger JP, Huitric E, Sandgren A, Manissero D. Interferon-γ release assays for the diagnosis of latent Mycobacterium tuberculosis infection: a systematic review and meta-analysis.Eur Respir J. 2011 Jan;37(1):88-99.