Исследование предназначено для выявления суммарных иммуноглобулинов (IgA, IgG, IgM) к коронавирусу SARS-CoV-2. Одновременное определение антител нескольких типов позволяет повысить диапазон чувствительности и информативность теста, поскольку сроки появления иммуноглобулинов различных классов при COVID-19 индивидуальны. Тест нацелен на выявление антител к RBD-домену спайкового (S) белка – именно они являются нейтрализующими (уничтожают вирус) и имеют большую клиническую значимость. Тест-система обладает максимальной чувствительностью и специфичностью и является верифицирующей (подтверждающей) для лабораторной диагностики COVID-19 (Временные методические рекомендации МЗ РФ, версия 10 (08.02.2021). Выдается единый результат для IgA, IgM, IgG (без уточнения класса выявленных антител) в качественном формате: "положительный"/"отрицательный". Исследование рекомендовано: 1) для снятия неопределенности иммунного статуса в отношении COVID-19 и более точного определения, был ли контакт с вирусом SARS-CoV-2; 2) как скрининговый тест перед вакцинацией для выявления лиц с бессимптомной формой инфекции.

Синонимы русские

Анализ крови для качественного суммарного определения антител к RBD домену спайкового (S) белка SARS-CoV-2 (IgG, IgM и IgA); антитела к рецептор-связывающему домену спайкового (S) белка вируса SARS-CoV-2, качественный тест.

Синонимы английские

SARS-CoV-2 Spike (S) Protein Receptor-Binding Domain (RBD) antibodies, total IgG/IgM/IgA.

Метод исследования

Иммуноферментный анализ.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

У лиц, зараженных вирусом SARS-CoV-2, симптомы COVID-19 могут не развиваться (случаи бессимптомного течения инфекции), быть слабовыраженными (малосимптомное течение) либо находиться в диапазоне от умеренно до крайне выраженных.

В ряде случаев может оказаться полезным применение серологических тестов для определения антител, вырабатывающихся в организме человека в ответ на заражение вирусом SARS-CoV-2.

Тесты на антитела обнаруживают иммуноглобулины, которые вырабатываются в качестве иммунного ответа человека на инфекцию SARS-CoV-2. Положительный результат свидетельствует о том, что человек потенциально подвергался воздействию SARS-CoV-2. Когда присутствуют антитела к иммуноглобулинам M (IgM), они могут указывать на активную или недавнюю инфекцию, тогда как антитела к иммуноглобулину G (IgG) появляются позже в процессе протекания инфекции и часто могут указывать на прошлую инфекцию, но не исключают недавнюю инфицированность пациентов, которые все еще могут быть заразными, особенно когда одновременно обнаруживаются антитела IgM.

Результаты исследований показали, что IgA вместе с IgG играют важную роль в нейтрализации SARS-CoV-2. Среди антител IgA является преобладающими антителами, присутствующими на поверхности слизистой оболочки и обеспечивающими защиту от вируса в дыхательных путях. IgA способствуют захвату антигенов в слизи, предотвращая прямой контакт патогенов с поверхностью слизистой оболочки. Положительный результат теста на IgA к нуклеокапсиду SARS-CoV-2 в первую неделю инфирования составляет 92,7 % по сравнению с положительным результатом теста на IgM (85,4 %) и IgG (77,9 %). Кроме того, сообщается о роли IgA в нейтрализации SARS-CoV-2 на ранних стадиях инфекции вместе с IgG. Эти данные свидетельствуют о том, что оба вида антител работают вместе, чтобы нейтрализовать вирус.

Среди IgG преобладающие подтипы, которые обеспечивают противовирусную активность, - это IgG1 и IgG3. Оба подтипа IgG связываются со всеми классами Fc-гамма-рецепторами человека (FcyR) для выполнения его эффекторной функции и являются результатом Th1-ответа. Напротив, IgG2 и IgG4 – результат Th2-ответа и в основном связаны с полисахаридными антигенами, и было также показано, что они индуцируются после вирусной инфекции.

Несколько вакцин против SARS-CoV2 находятся на разных стадиях клинических испытаний в разных популяциях. Понимание реакции антител, особенно подтипов IgA и IgG с точки зрения титров после естественной инфекции и выздоровления имеет большое значение для оценки реакции, вызванной вакциной.

Гуморальные иммунные реакции играют решающую роль в защите людей от инфекции SARS-CoV-2, особенно благодаря активности нейтрализующих антител. IgA доминируют в раннем специфическом ответе антител к SARS-CoV-2 по сравнению с концентрациями IgG и IgM.

Гуморальные иммунные реакции обычно характеризуются первичными реакциями антител IgM, за которыми следуют вторичные реакции антител, связанные с иммунной памятью и состоящие из IgG, IgA и IgE. В ранних гуморальных реакциях, специфичных к SARS-CoV-2, преобладают антитела IgA. Из специфичных к вирусу антител – IgG, IgM и IgA – IgA в большей степени способствуют нейтрализации вируса по сравнению с IgG.

Также возможно, что "созревание" системного ответа IgG может быть немного задержано по сравнению с ответом IgA слизистой оболочки. Исследования показывают, что сывороточный IgA, особенно анти-RBD IgA, обнаруживается раньше по сравнению с IgG. Время до положительной реакции против RBD заметно меньше для IgA, чем для IgG, а потенциал нейтрализации сыворотки связан с антителами изотипа IgA против RBD.

После заражения COVID-19 описано два типа антител: связывающие и нейтрализующие. Связывающие антитела – это те, которые могут быть обнаружены в крови пациента, что может указывать на наличие предшествующей инфекции без определенного описания ингибирования репликации вируса. Обнаружение нейтрализующих антител (Nab), с другой стороны, является более специализированным и основано на функциональной способности антител в сыворотке/плазме предотвращать заражение вирусом in vitro.

Серологическое тестирование не заменяет вирусологического и не должно использоваться для установления наличия или отсутствия острой инфекции SARS-CoV-2.

Кроме того, было доказано, что нейтрализующие антитела имеют положительную корреляцию с возрастом, мужским полом и тяжестью заболевания. Исследования показали, что Nab были выше у пожилых пациентов по сравнению с пациентами среднего и молодого возраста, причем последние имели более низкие титры нейтрализации. Кроме того, титры Nab положительно коррелировали с уровнем С-реактивного белка и отрицательно с количеством лимфоцитов на момент поступления. Следует отметить, что у молодых людей не обязательно будут низкие титры, так как в том же исследовании также были обнаружены два пациента с очень высокими титрами нейтрализации в этой возрастной группе, что побудило рассмотреть другие факторы. Что касается различий по полу, несмотря на то что у мужчин и женщин, по-видимому, одинаковый риск заражения этим вирусом, существуют значительные различия в ходе и исходе инфекции у них, а также наблюдаются худшие исходы и более высокие титры Nab среди мужского населения. Действительно, клинические результаты показывают, что у мужчин более высокая тяжесть течения и смертность от инфекции COVID-19, чем у женщин.

Большинство доступных серологических анализов SARS-CoV-2 выявляют иммуноглобулин М (IgM), иммуноглобулин G (IgG), иммуноглобулин А (IgA) или общие антитела. Современные данные подтверждают, что сероконверсия происходит примерно через две недели после появления симптомов. В некоторых литературных источниках предполагается, что обнаружение антител IgM и IgA по сравнению с IgG может указывать на более раннюю инфекцию. Сообщалось о различной чувствительности и специфичности анализов, обнаруживающих IgM, IgG или суммарные антитела, причем некоторые исследования показали, что иммуноанализы с общими антителами могут быть более чувствительными. По сравнению с IgM ожидается, что IgG будет играть большую роль в серологическом мониторинге COVID-19 из-за его классически более длительного ответа.

Для чего используется исследование?

• Для снятия неопределенности иммунного статуса в отношении COVID-19 и более точного определения, был ли контакт с вирусом SARS-CoV-2;
• Как скрининговый тест перед вакцинацией для выявления лиц с бессимптомной формой инфекции.

Когда назначается исследование?

• При подтверждении инфекции SARS-CoV-2 у пациентов с ПЦР-положительным тестом на COVID-19.
• При обследовании инфицированных, но бессимптомных пациентов по COVID-19.
• При обследовании пациентов с COVID-19, проверенных через несколько недель после начала заболевания.
• При обследовании пациентов с низкой вирусной нагрузкой по COVID-19.
• При проверке восприимчивости или устойчивости к последующему повторному заражению и при проведении эпидемиологических и надзорных исследований.
• При скрининге донорской крови для переливания пациентам с тяжелой формой COVID-19.
• При диагностике подозрительных пациентов с отрицательными результатами ОТ-ПЦР и для выявления бессимптомной инфекции.

Что означают результаты?

Референсные значения

Результат: отрицательный.

КП (коэффициент позитивности): 0 – 0,8.

Положительный результат:

• иммунный ответ вследствие воздействия вируса SARS-CoV-2 (недавнего или прошлого);
• иммунный ответ на вакцинацию против SARS-CoV-2 препаратами вакцин на основе S-белка.

Отрицательный результат:

• ранее не было воздействия SARS-CoV-2;
• инкубационный период инфекции или ее ранняя стадия;
• отдаленные сроки после перенесенной инфекции (более 3-5 месяцев).

Что может влиять на результат?

Эффективность серологических тестов существенно различается в зависимости от исследуемой группы (например, среди пациентов с легкой, умеренной и тяжелой формами заболевания или в группах пациентов молодого и пожилого возраста), а также от продолжительности выполнения теста и вирусного белка, являющегося "мишенью". Для более полного понимания этих различий в эффективности тестов необходимы дальнейшие исследования. При проведении тестов на выявление антител к коронавирусу может происходить перекрестная реакция с другими антителами, например, к другим патогенным микроорганизмам, в том числе другим коронавирусам человека, либо с биологическими маркерами наблюдающихся у пациента состояний (беременность, аутоиммунные заболевания), что может приводить к ложноположительным результатам.

Серологические исследования не должны применяться в качестве самостоятельного средства диагностики острой инфекции в клинической практике или при отслеживании контактов. Интерпретация выполненного теста должна производиться специалистом, она будет зависеть от ряда факторов, в том числе длительности заболевания, клинических проявлений, эпидемиологических характеристик и распространенности инфекции в конкретных условиях.

Определение фрагментов вирусных частиц, таких как белки или нуклеиновые кислоты, при помощи вирусологического исследования является наиболее убедительным признаком вирусной инфекции. Результаты такого тестирования могут быть положительными у зараженных лиц, не имеющих симптомов инфекции (бессимптомное течение) либо до появления симптомов (предсимптомная стадия), а также в течение всего периода болезни (манифестная инфекция). В дебюте заболевания COVID-19 спектр симптомов может быть крайне разнообразным. Симптомы заболевания могут быть стертыми или проявляться выраженными признаками пневмонии, лихорадочным состоянием/сепсисом или реже гастроэнтеритом либо неврологическими нарушениями. При необходимости пациенты должны проходить тестирование на другие патогенные микроорганизмы в соответствии с рекомендациями по клиническому ведению случаев заболеваний на местном уровне, тем не менее это не должно отменять проведение тестов на определение вируса SARS-CoV-2.

Также рекомендуется

[09-185] Коронавирус COVID‑19 (SARS‑CoV‑2, РНК [реал‑тайм ПЦР])

[40-657] Комплексная диагностика ОРВИ (все виды ОРВИ + COVID‑19)

[20-137] Т‑клеточный иммунитет к COVID‑19

Кто назначает исследование?

Терапевт, инфекционист, эпидемиолог, врач общей практики.

Важные замечания

Результаты исследования не являются диагнозом и требуют врачебной интерпретации.

Литература

1. Bohn, Mary Kathryn, Loh, Tze Ping, Wang, Cheng-Bin, Mueller, Robert, Koch, David, Sethi, Sunil, Rawlinson, William D., Clementi, Massimo, Erasmus, Rajiv, Leportier, Marc, Grimmler, Matthias, Yuen, KY, Mancini, Nicasio, Kwon, Gye Cheol, Menezes, María Elizabeth, Patru, Maria-Magdalena, Gramegna, Maurizio, Singh, Krishna, Najjar, Osama, Ferrari, Maurizio, Horvath, Andrea R., Lippi, Giuseppe, Adeli, Khosrow and the IFCC Taskforce on COVID-19. "IFCC Interim Guidelines on Serological Testing of Antibodies against SARS-CoV-2" Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (CCLM), vol. 58, no. 12, 2020, pp. 2001-2008.

2. Padoan A, Sciacovelli L, Basso D, Negrini D, Zuin S, Cosma C, Faggian D, Matricardi P, Plebani M. IgA-Ab response to spike glycoprotein of SARS-CoV-2 in patients with COVID-19: A longitudinal study. Clin Chim Acta. 2020 Aug;507:164-166.

3. Meinberger D, Koch M, Roth A, Hermes G, Stemler J, Cornely OA, Streichert T, Klatt AR. Analysis of IgM, IgA, and IgG isotype antibodies Directed against SARS-CoV-2 spike glycoprotein and ORF8 in the course of COVID-19. Sci Rep. 2021 Apr 26;11(1):8920.

4. Long QX, Liu BZ, Deng HJ, Wu GC, Deng K, Chen YK, Liao P, Qiu JF, Lin Y, Cai XF, Wang DQ, Hu Y, Ren JH, Tang N, Xu YY, Yu LH, Mo Z, Gong F, Zhang XL, Tian WG, Hu L, Zhang XX, Xiang JL, Du HX, Liu HW, Lang CH, Luo XH, Wu SB, Cui XP, Zhou Z, Zhu MM, Wang J, Xue CJ, Li XF, Wang L, Li ZJ, Wang K, Niu CC, Yang QJ, Tang XJ, Zhang Y, Liu XM, Li JJ, Zhang DC, Zhang F, Liu P, Yuan J, Li Q, Hu JL, Chen J, Huang AL. Antibody responses to SARS-CoV-2 in patients with COVID-19. Nat Med. 2020 Jun;26(6):845-848.

5. Tré-Hardy M, Wilmet A, Beukinga I, Favresse J, Dogné JM, Douxfils J, Blairon L. Analytical and clinical validation of an ELISA for specific SARS-CoV-2 IgG, IgA, and IgM antibodies. J Med Virol. 2021 Feb;93(2):803-811.

6. Chvatal-Medina M, Mendez-Cortina Y, Patiño PJ, Velilla PA, Rugeles MT. Antibody Responses in COVID-19: A Review. Front Immunol. 2021 Apr 15;12:633184.

7. Mahajan A, Manchikanti L. Value and Validity of Coronavirus Antibody Testing. Pain Physician. 2020 Aug;23(4S):S381-S390.

8. ВОЗ. Диагностическое тестирование для определения вируса SARS-CoV-2: временные рекомендации. 2020 год. 23 с.