Выявление и количественное определение ДНК 4 видов лактобактерий, преобладающих в вагинальной микрофлоре, – Lactobacillus iners, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus crispatus и Lactobacillus jensenii – методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме "реального времени". Используется для оценки состояния микрофлоры влагалища и выявления воспалительных процессов на ранней стадии. (Набор реагентов «АмплиПрайм® Лакто-скрин»).
Синонимы русские
Латкобактерии, микробиота влагалища, микрофлора урогенитального тракта, микрофлора влагалища, дисбактериоз влагалища, бактериальный вагиноз.
Синонимы английские
Specific composition of the vaginal lactoflora, Real Time PCR.
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
* Линейный диапазон измерения и предел измерения
Диапазон, в котором набор «АмплиПрайм® Лакто-скрин» дает линейный ответ, находится в пределах от 4×103 до 1×109 ГЭ/мл.
Единицы измерения
ГЭ/мл (геномный эквивалент клеток микроорганизмов на 1 мл биологического образца).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Соскоб урогенитальный.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Взятие урогенитального мазка рекомендуется производить до менструации или через 2-3 дня после её окончания.
Общая информация об исследовании
Из всего разнообразия лактобацилл в составе влагалищной микрофлоры чаще всего доминирует один из четырех видов лактобактерий (68,9 %): в первую очередь L. crispatus (18,6 %) или L. iners (33,1 %), L. gasseri, L. jensenii. Преобладание двух-трех видов лактобактерий одновременно наблюдалось у 24,9 % женщин (Зорников, 2017). Исследования видового разнообразия лактобактерий в нормофлоре и различных патологиях показало преобладание L. crispatus в вагинальном биотопе здоровых женщин. L. iners, в свою очередь, выявляется как у здоровых женщин, так и при бактериальном вагинозе (БВ), в отличие от L. crispatus, который выявляется преимущественно в нормофлоре (Petrova et al., 2015). В физиологическом микробиоценозе чаще обнаруживается видовое разнообразие лактобацилл (выявление более 2 видов), по сравнению с дисбиозом влагалища (Будиловская, 2017). Воспалительные заболевания нижних отделов
репродуктивной системы женщин и БВ могут сопровождаться повышением так же доли L. gasseri в составе лактофлоры (Бурменская и др., 2014, Мелкумян, 2013).
L. iners может быть предиктором преждевременных родов и невынашивания беременности (Синякова и др., 2019), а также послеродовых осложнений, в частности у женщин с нарушением инволюции матки чаще выявлялся L. iners (Дадаева и др., 2021).
Есть предположения, что L. iners выступают в качестве триггера развития вагинального дисбиоза (Petrova et al., 2017). Преобладание L. iners ассоциировано с более высоким уровнем провоспалительных факторов, в частности интерлейкина-1а, интерлейкина-18, фактора торможения
миграции макрофагов, фактора некроза опухоли, которые ответственны за развитие вагинального воспалительного процесса (De Seta et al., 2019).
Защитный эффект лактобактерий от потенциально патогенных бактерий проявляется в снижении вагинального pH за счет синтеза молочной кислоты, при этом способность бактерий синтезировать молочную кислоту отличается в зависимости от вида лактобактерий (Годовалов и др., 2019). L. crispatus, L. gasseri и L. jensenii продуцируют D и L изомеры молочной кислоты при ферментировании гликогена, тогда как L. iners – только L-изомер, так как у нее отсутствует ген, кодирующий D-лактат-дегидрогеназу (France et al., 2016). Разные изомеры по-разному действуют на иммунную систему хозяина (Witkin et al.), кроме того, показано, что D-изомеры оказывают более выраженное ингибирующее действие на экзогенные бактерии, по сравнению с L-молочной кислотой (Tachedjian et al., 2017). Таким образом, L. iners оказываются менее эффективными в предотвращении проникновения патогенных бактерий (Basavaprabhu et al., 2020).
Таким образом, выявление более двух видов лактобактерий, один из которых L. crispatus, свидетельствует о нормфлоре, тогда как L. iners преобладает при воспалительных заболеваниях нижних отделов репродуктивной системы, БВ, может быть предиктором невынашивания беременности и послеродовых осложнений.
Для чего используется исследование?
Для оценки микрофлоры урогенитального тракта женщин при подозрении на дисбактериоз влагалища (бактериальный вагиноз), а также при контроле эффективности лечения.
Результаты ПЦР-исследования учитываются в комплексной диагностике заболевания.
Что означают результаты?
Концентрация ДНК L. iners, L. gasseri, L. crispatus и L. jensenii определяется как абсолютные значения концентраций ДНК микроорганизмов, отражающие количество геномных эквивалентов клеток микроорганизмов в 1 мл биологического образца (ГЭ/мл).
Выдается определение 4 показателей:
ПЦР-исследование является одним из методов всестороннего обследования пациента, на основании которых лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает лечение. Результаты "Лакто-скрина" не являются диагнозом, их следует рассматривать и интерпретировать в сочетании с данными других клинических и лабораторных исследований. Интерпретация результатов должна проводиться лечащим врачом индивидуально.
Литература
1. Зорников Д.Л. Особенности видового состава вагинальной лактофлоры и возможности коррекции дисбиоза влагалища у женщин репродуктивного возраста: Автореф. дисс. канд. мед. наук. – Челябинск, 2017. – 23 с.
2. Будиловская О.В., Шипицына Е.В, Герасимова Е.Н., Сафронова М.М., Савичева А.М. Видовое разнообразие вагинальных лактобацилл в норме и при дисбиотических состояниях. Журнал акушерства и женских болезней. 2017. 66(2):24-32.
3. Petrova M. I., Lievens E., Malik S., Imholz N., Lebeer S. Lactobacillus Species as Biomarkers and Agents That can Promote Various Aspects of Vaginal Health. Front. Physiol.2015. 6(81).
4. Бурменская О.В., Байрамова Г.Р., Непша О.С., Трофимов Д.Ю., Муравьева В.В., Абакарова П.Р., Стрельченко Д.А., Кряжева В.С., Сухих Г.Т. Видовой состав лактобактерий при неспецифических вагинитах и бактериальном вагинозе и его влияние на локальный иммунитет. Акушерство и гинекология. 2014.
5. Мелкумян А.Р., Припутневич Т.В., Анкирская А.С., Трофимов Д.Ю., Муравьева В.В., Муллабаева С.М., Завьялова М.Г. Видовой состав лактобактерий при различном состоянии микробиоты влагалища у беременных. Клиническая микробиология и антимикробная
химиотерапия. 2013; 15(1):72-79.
6. Синякова А.А., Шипицына Е.В., Будиловская О.В. и др. Клинико-анамнестические и микробиологические предикторы невынашивания беременности. Журнал акушерства и женских болезней. 2019. T. 68. № 2. С. 59-70.
7. Дадаева Д.Г., Будиловская О.В., Крысанова А.А., Хуснутдинова Т.А., Савичева А.М., Коган И.Ю. Значение вагинальных лактобацилл в восстановлении микробиоценоза влагалища у родильниц в раннем послеродовом периоде в зависимости от способа родоразрешения. Журнал акушерства и женских болезней. 2021. Т. 70. № 4. С. 15-23.
8. Petrova M. I., Reid G., Vaneechoutte M., Lebeer S. Lactobacillus Iners: Friend or Foe? Trends Microbiol. 2017. 25 (3): 182-191.
9. De Seta F., Campisciano G., Zanotta N., Ricci G., Comar M. The Vaginal Community State Types Microbiome-Immune Network as Key Factor for Bacterial Vaginosis and Aerobic Vaginitis. Front. Microbiol. 2019. 10, 2451.
10. Годовалов А.П., Даниелян Т.Ю., Карпунина Т.И. Характеристики штаммов лактобактерий, обладающие диагностической значимостью в гинекологической практике. Клиническая лабораторная диагностика. 2019. 64(2):111-116.
11. France M. T., Mendes-Soares H., Forney L. J. Genomic Comparisons of Lactobacillus Crispatus and Lactobacillus Iners Reveal Potential Ecological Drivers of Community Composition in the Vagina. Appl. Environ. Microbiol. 2016. 82 (24), 7063-7073.
12. Tachedjian G., Aldunate M., Bradshaw C. S., Cone R. A. The Role of Lactic Acid Production by Probiotic Lactobacillus Species in Vaginal Health. Res. Microbiol.2017 168 (9-10), 782-792.
13. Basavaprabhu H. N., Sonu K. S., Prabha R. Mechanistic Insights Into the Action of Probiotics Against Bacterial Vaginosis and its Mediated Preterm Birth: An Overview. Microb. Pathog.2020. 141.