Human Herpes Virus 6, ДНК [реал-тайм ПЦР], количественно

Исследование для выявления возбудителя герпес-вирусной инфекции 6-го типа (Human Herpes Virus 6), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) количественно определяется генетический материал (ДНК) вируса в образце биоматериала.

Синонимы русские

Герпес-вирус 6 типа, ВГЧ-6, РТ-ПЦР; вирус герпеса 6 типа.

Синонимы английские

HHV-6, DNA [Real-time PCR].

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Ликвор, мазок из зева (ротоглотки), слюну, биоптат (биоптат лёгких, печени, ЖКТ), венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

6-й тип герпес-вируса человека (ВГЧ-6) впервые был определен относительно недавно, в 1986 г., в крови ВИЧ-инфицированных пациентов. К настоящему времени установлено, что инфекция ВГЧ-6 широко распространена и имеет 2 подтипа, отличающихся генетически, – А и В. В целом более распространен подтип В, однако подтип А чаще обнаруживают у пациентов с иммунодефицитами.

Полная репликация вируса происходит только в Т-лимфоцитах, но ВГЧ-6 может быть выявлен и в других клетках – моноцитах, В-лимфоцитах, а также в ткани мозга, печени, слюнных желез, в эндотелии.

Наиболее вероятный путь заражения – воздушно-капельный, со слюной, не исключена передача инфекции от матери к ребенку во время беременности.

Также существует возможность инфицирования при трансплантации органов, гемотрансфузиях, через медицинские инструменты. Наркоманы и медицинские работники могут заразиться при случайном уколе иглой шприца, содержащего кровь больного либо инфицированного.

Первый раз заражение практически всегда происходит в возрасте от 4 до 24 месяцев. В большинстве случаев ВГЧ-6 протекает бессимптомно, а если проявляется, то чаще всего как внезапная экзантема и быстро развивающаяся сильная лихорадка, продолжающаяся 3-4 дня. Через несколько часов после нормализации температуры появляются эритематозные пятна или пятнисто-папулезная сыпь. Сходство внезапной экзантемы с симптомами кори или краснухи зачастую приводит к постановке ошибочного диагноза.

В некоторых случаях бывают осложнения со стороны центральной нервной системы (судороги на фоне высокой температуры, редко энцефалит, менингоэнцефалит, серозный менингит).

Взрослые редко инфицируются ВГЧ-6, причем заражение у них может сопровождаться симптомами инфекционного мононуклеоза (вирус Эпштейна – Барр в таком случае отсутствует) или фульминантного гепатита.

ВГЧ-6 способен вызвать отторжение трансплантата у реципиентов. Осложнения вследствие активации ВГЧ-6 отмечены у пациентов после пересадки костного мозга, почек, печени, легких. В частности, пациенты после трансплантации костного мозга часто страдают от заболеваний, обусловленных HHV-6 (интерстициальная пневмония, супрессия костного мозга, менингоэнцефалит). Активация ВГЧ-6 является причиной 80 % случаев идиопатической лейкопении после трансплантации печени. К счастью, при своевременной диагностике ВГЧ-6 поддается лечению с помощью лекарственных препаратов.

ВИЧ-инфицированные составляют еще одну категорию лиц с иммунодефицитом, у которых активация ВГЧ-6 способна приводить к серьезным осложнениям (к поражениям ЦНС, к пневмонии и пр.) и прогрессированию основного заболевания. Кроме того, активный ВГЧ-6 может способствовать переходу ВИЧ из латентной в активную форму, поэтому регулярный контроль активности ВГЧ-6 у ВИЧ-положительных пациентов важен для своевременного начала антивирусной терапии.

Сегодня активно исследуется возможная роль ВГЧ-6 в развитии рассеянного склероза, синдрома хронической усталости, лимфопролиферативных заболеваний.

Так как ВГЧ-6 в латентной форме распространен практически повсеместно, очень важно вовремя устанавливать характер его течения – активный/неактивный. Активация любой вирусной инфекции начинается с размножения (репликации) вируса в клетке-хозяине. Далее в большинстве случаев клетки-хозяева погибают, а новые вирусы выходят в межклеточное пространство (внутритканевую жидкость) для заражения новых клеток. Оттуда вирусные частицы попадают в различные биологические жидкости (кровь, мочу, ликвор) и железистые секреты, где могут быть легко обнаружены с помощью ПЦР. Выявление вирусных ДНК/РНК в бесклеточных образцах биологических жидкостей или железистых секретах является однозначным указанием на активную вирусную инфекцию. Однако диагностика инфекции осложняется тем, что ВГЧ-6 после репликации в клетке-хозяине заражает другие клетки напрямую, проникая через межклеточные перегородки и избегая межклеточных пространств. Таким образом, подтверждение активности ВГЧ-6 посредством ПЦР в бесклеточных образцах биологических жидкостей и секретах удается не во всех случаях. В связи с этим возникает необходимость подтверждения активности/неактивности ВГЧ-6 с помощью серологических методов.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять генетический материал возбудителя на ранних этапах заболевания. Он характеризуется высокими показателями диагностической чувствительности и специфичности, быстротой получения конечного результата и доступностью. Особенностью метода является возможность выявлять ДНК вируса даже при малом содержании её в исследуемом биологическом материале. Метод основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка ДНК. Для диагностики может использоваться разнообразный биологический материал, взятый у детей, взрослых лиц, людей с патологией иммунной системы, беременных женщин. Метод позволяет определять количество молекул ДНК исследуемого вируса, что является важным в диагностике острой формы инфекции, реактивации персистентной инфекции, носительстве вируса, а также при контроле эффективности проводимой противовирусной терапии.

Для чего используется исследование?

• При дифференциальной диагностике детских инфекций, протекающих с высокой температурой и сыпью.
• При диагностике инфекционного мононуклеоза при отрицательном тесте на вирус Эпштейна – Барр.
• В комплексе обследований пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями и гемобластозами.
• При обследовании реципиентов органов и тканей до и после трансплантации.
• При диагностике вирус-ассоциированных заболеваний у ВИЧ-инфицированных и при других иммунодефицитных состояниях (например, синдроме хронической усталости).
• При контроле за эффективностью проведенного антивирусного лечения.

Когда назначается исследование?

• Для подтверждения наличия/отсутствия инфекции.
• Для того чтобы определить характер течения инфекции – активный/неактивный.
• Для дифференциальной диагностики герпетических инфекций.

Что означают результаты?

Причины положительного результата

• Однократный положительный результат реал-тайм ПЦР однозначно свидетельствует об активной ВГЧ-6 инфекции.

Причины отрицательного результата

• Однократный отрицательный результат реал-тайм ПЦР может быть признаком отсутствия активной ВГЧ-6-инфекции и нуждается в дополнительном подтверждении с помощью ретроспективных исследований вирусоспецифических IgG-антител.

Что может влиять на результат?

Свойство ВГЧ-6 поражать другие клетки напрямую, не выходя за их пределы, способствует ложноотрицательному результату.

Также рекомендуется

• Human Herpes Virus 6, IgG

Кто назначает исследование?

Аллерголог-иммунолог, акушер, гинеколог, инфекционист, педиатр, невролог, гематолог, хирург.

Литература

1. Nolan T, Hands RE, Bustin SA (2006). "Quantification of mRNA using real-time RT-PCR.". Nat. Protoc. 1: 1559-1582.
2. VanGuilder HD, Vrana KE, Freeman WM (2008). "Twenty-five years of quantitative PCR for gene expression analysis". Biotechniques 44: 619 – 626.
3. Salahuddin S.Z., Albashi D.V.,Markham P.D., et.al., (1986) Isolation of a new virus, HBLB, in patient with lymphoproliferative disorders. Science 234:596-601.
4. Asano Y., Yoshikawa T., Kajita Y et al.(1992) Fatal encephalitis/encephalopathy in primary human herpesvirus-6 infection. Arch. Dis. Child. 67:1484-1485.
5.  Zhen Z, J Virol. 2005 Sep;79(18):11914-24.The human herpesvirus 6 G protein-coupled receptor homolog U51 positively regulates virus replication and enhances cell-cell fusion in vitro.
6. Gautheret-Dejean, A J Virol Methods. 2002 Feb;100(1–2):27-35. Development of a real-time polymerase chain reaction assay for the diagnosis of human herpesvirus-6 infection and application to bone marrow transplant patients.
7. Krueger GR, Ablashi DV, Josephs SF, Salahuddin SZ, Lembke U, Ramon A, Bertram G.Clinical indications and diagnostic techniques of human herpesvirus-6 (HHV-6) infection.n Vivo. 1991 May-Jun;5(3):287-95.
8. Yamanishi K., Okuno T., Shiraki K., et al. (1988) Identification of human herpesvirus-6 as casual agent for exanthem subitum. Lancet 1:1065-1067.
9. Preziozo P.J., Cangiarella J., Lee M., et al. (1992) Fatal disseminated infection with humanherpesvirus-6. J.Pediatrics 120:921–923.