Rickettsia species, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Риккетсиозы – заболевания, вызванные патогенными микроорганизмами риккетсиями. Риккетсии по своим свойствам занимают промежуточное положение между бактериями и вирусами. Они живут и размножаются внутри живых клеток, по размерам намного мельче бактерий – данные качества присущи вирусам. Основным путем инфицирования человека является проникновение риккетсий в кровь во время укусов или при втирании фекалий вшей, блох, клещей при расчесывании кожи. Для большинства риккетсиозов характерна сыпь и продолжительная лихорадка. В зависимости от вида возбудителя, тяжести протекания инфекции может наблюдаться поражение различных внутренних органов: легких, почек, печени, головного мозга. Данное исследование определяет ДНК риккетсий в крови или в самом клеще высокоэффективным методом полимеразной цепной реакции. (Если удалось снять клеща – можно принести его исследование.)

Синонимы русские

Анализ на риккетсиоз, анализ на риккетсии, исследование клеща на риккетсиоз.

Синонимы английские

Rickettsia species, DNA [real-time PCR], Identification of Tick-Borne Pathogens: Rickettsiosis.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь, клеща.

Общая информация об исследовании

Род Rickettsia (семейство Rickettsiaceae) представлен мелкими полиморфными а-протеобактериями, являющимися облигатными внутриклеточными паразитами эукариотических клеток. Многие виды риккетсий являются возбудителями различных инфекционных заболеваний человека – риккетсиозов. Передача инфекции осуществляется широким кругом кровососущих членистоногих (клещами, вшами, блохами). Одним из наиболее значимых риккетсиозов является сыпной тиф, вызываемый R. prowazekii, переносчиком которой служит платяная вошь. Большое значение в инфекционной патологии человека имеют риккетсии группы клещевой пятнистой лихорадки, передающиеся иксодовыми клещами различных видов.

На территории Российской Федерации регистрируется заболеваемость североазиатским клещевым риккетсиозом (риккетсиоз Средней Азии, сибирский клещевой тиф), Астраханской пятнистой лихорадкой и дальневосточным клещевым риккетсиозом. Североазиатский клещевой риккетсиоз, возбудителем которого является R. sibiricd, регистрируется преимущественно на юге Западной и Восточной Сибири, Дальнего Востока, а также в Казахстане, Киргизстане, Монголии и Китае. Эпидемически активные очаги Астраханской пятнистой лихорадки располагаются в Астраханской области и смежных с ней территориях (Калмыкия, Волгоградская область). Возбудителем данного заболевания является R. conorii subsp. cuspia. Дальневосточный клещевой риккетсиоз, вызываемый R. heilongjiangensis, встречается в Хабаровском крае и Амурской области. Использование молекулярно-биологических методов позволило обнаружить генетический материал и других патогенных для человека видов риккетсий (R. slovaca, R. raoultii, R. helvetica, R. aeschli-mannii, R. tarasevichiae), а также риккетсий с неустановленной патогенностью для человека в клещах, собранных на территории России.

Заболевания, вызываемые риккетсиями, могут иметь различные клинические проявления, в основном неспецифические (головная боль, повышение температуры, тошнота, сопровождающаяся рвотой, воспаление регионарных лимфоузлов, сыпь), поэтому риккетсиозы довольно трудно диагностировать. Инкубационный период длится от 2 до 7 дней, чаще 3-6 дней. В зависимости от генетических особенностей как возбудителя, так и пациента клиническая картина риккетсиозов может сильно изменяться, что существенно затрудняет диагностику этой группы инфекционных заболеваний. Поэтому в диагностике риккетсиозов особое значение имеют лабораторные методы: микробиологические, серологические и молекулярно-биологические. Они принципиально важны для быстрой и надежной диагностики риккетсиозов, в том числе протекающих с атипичной симптоматикой.

В лабораторной диагностике инфекционных заболеваний используется полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (ПЦР-РТ), характеризующаяся высокой чувствительностью и специфичностью, а также значительным сокращением времени проведения анализа.
Лечение риккетсиозов консервативное и заключается в приеме антибактериальных препаратов. Заболевание хорошо лечится, в хроническую форму не переходит, однако при отсутствии лечения, в зависимости от конкретного подвида возбудителя, может грозить опасными последствиями. От человека к человеку не передается. Ранняя диагностика и начало лечения значительно улучшают прогноз и течение заболевания.

Особенности метода реал-тайм ПЦР:

• чувствительность выявления ДНК – Rickettsia species определяется по четырём образцам, приготовленным из стандартного образца предприятия СОП* ДНК Rickettsia species, с содержанием ДНК Rickettsia species по 100 копий в пробе 100 %;
• специфичность выявления ДНК – Rickettsia species определяется по четырём образцам, приготовленным из отрицательных сывороток стандартной панели предприятия, СПП ОКС ** – 100 %;
• диагностическая чувствительность выявления ДНК Rickettsia species – клинические испытания, проведённые на 229 положительных образцах, показали 100 % чувствительность (интервал 98,7−100 % с доверительной вероятностью 90 %);
• диагностическая специфичность выявления ДНК Rickettsia species – клинические испытания, проведённые на 249 отрицательных
• образцах, показали 100 % специфичность (интервал 98,8−100% с доверительной вероятностью 90 %).

* СОП – стандартная операционная процедура.

** СПП ОКС – стандартная панель предприятия образцов контрольных сывороток.

Для чего используется исследование?

Для проверки заражения риккетсиями.

Когда назначается исследование?

При подозрении на риккетсиозы. К группе риска относятся:

• проживающие в областях, эндемичных по заболеваемости риккетсиозами;
• пребывающие на территориях с большой численностью клещей в весенне-летний период (период наибольшей активности клещей);
• работники животноводческих ферм;
• проживающие в плохих санитарных условиях.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Отрицательный результат: отсутствие ДНК риккетсий в исследуемом материале.

Положительный результат: ДНК риккетсий выявлена.

Литература

Карташов М.Ю., Микрюкова Т.П., Терновой В.А., Москвитина Н.С., Локтев В.Б. Высокоэффективная детекция ДНК риккетсий методом ПЦР в реальном времени. Клиническая лабораторная диагностика, 2015; 60 (12): 39–43. ФБУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор", 630559, Кольцово, Россия; Новосибирский государственный университет, 630090, г. Новосибирск, Россия; Томский государственный университет, 634050, г. Томск, Россия; Институт цитологии и генетики, 630090, г. Новосибирск, Россия.