Иммуноцитохимическое исследование соскобов шейки матки с определением белка р16

Определение экспрессии онкобелка р16 на поверхности эпителиальных клеток для скрининга рака шейки матки с помощью иммуноцитохимического исследования.

Синонимы русские

Белок р16; p16^INK4a; онкопротеин; иммуноцитохимическое исследование.

Синонимы английские

р16 protein; p16^INK4a; oncoprotein; immunocytochemicalstudy.

Метод исследования

Иммуноцитохимический метод.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок смешанный из цервикального канала и поверхности шейки матки.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Рак шейки матки занимает третье место среди всех злокачественных заболеваний у женщин в мире ипервое место в структуре онкологической заболеваемости женщин 15-40 лет в Российской Федерации. К факторам риска развития рака шейки матки относится инфицирование вирусом папилломы человека (ВПЧ или HPV) онкогенных серотипов HPV16, HPV18, HPV31, HPV33, HPV35 и др., а также хронические воспалительные гинекологические заболевания, инфекции, семейный онкологический анамнез, случаи рака шейки матки у родственников, иммунодефициты, курение.

В настоящее время основным методом скрининга рака шейки матки и предраковых состояний является цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала по Папаниколау (мазок по Папаниколау, Рар-тест). Несмотря на общедоступность, надежность и широкое применение, данный метод имеет ряд недостатков: отсутствие стандартных методов взятия биоматериала для исследования, что может привести к ложноотрицательным результатам в 20-30 % случаев; вероятность ложноположительных результатов в 5-70 % случаев; проблемы, связанные с повторным забором материала. Усовершенствованный метод получения мазков с помощью метода жидкостной цитологии позволяет частично преодолеть недостатки традиционного метода. Кроме того, жидкостная цитология дает возможность выполнять молекулярные виды исследования, одним из которых является иммуноцитохимическое исследование.

Иммуноцитохимичский метод – это метод молекулярной иммунологической диагностики, позволяющий идентифицировать клеточные и тканевые молекулы-антигены в результате их связывания с антителами и формирования комплекса "антиген-антитело". Он позволяет проводить иммунологический анализ цитологического материала в условиях сохранения морфологии клеток.

В современной диагностике рака шейки матки мммуноцитохимическое исследование позволяет выявлять белок р16 (p16^INK4a), а точнее его экспрессию на поверхности эпителиальных клеток. Исследованию могут быть подвергнуты отдельные мазки из шеечного канала (эндоцервикса) или с наружной поверхности шейки матки (экзоцервикса) или смешанный мазок, полученный при нанесении на одно предметное стекло биоматериала из эндоцервикса и экзоцервикса.

Белок р16 – это клеточный протеин, участвующий в регуляции клеточного цикла и являющийся ингибитором активности циклинзависимой киназы CDK4/6. В норме киназа неактивна, и клеточная пролиферация инактивирована за счет наличия прочной связи фактора транскрипции E2F с белком-супрессором рRb. Белок р16 осуществляет контроль разобщения комплекса E2F-Rb, не допуская пролиферации клетки. В нормально функционирующих клетках синтез р16 сдерживается по механизму обратной связи и, следовательно, концентрация данного белка в нормальной клетке чрезвычайно мала, что проявляется негативной иммуноцитохимической реакцией. Онкобелок Е7 ВПЧ с высоким онкогенным риском посредством внутриклеточных механизмов приводит к разобщению комплекса E2F-рRb, активации CDK4/6 кинызы, а впоследствии стимулирует чрезмерную клеточную пролиферацию. При этом повышается экспрессия белка р16, что проявляется положительной иммуцитохимической реакцией мазков клеток.

Иммуноцитохимическое исследование онкобелка р16 позволяет достоверно дифференцировать опухолевую и неопухолевую дисплазии, а также обладает высокой диагностической чувствительностью. Экспрессия данного белка связана со слабовыраженной (CINI), умеренной (CINII) и резковыраженной дисплазией (CINIII) и внутриэпительным раком шейки матки. Он практически не обнаруживается в клетках плоского эпителия без признаков дисплазии (0-2 % случаев).

Таким образом, выявление экспрессии белка р16^INK4a иммуноцитохимическим методом в дополнение к рутинному методу жидкостной цитологии и окраски мазков по Папаниколау позволяет повысить чувствительность теста, выявлять персистирующую папиллома-вирусную инфекцию до появления морфологических изменений, с наибольшей точностью обнаружить риск развития рака шейки матки, своевременно поставить диагноз и назначить требуемое лечение.

Для чего используется исследование?

• Для скрининговой диагностики рака шейки матки и предраковых состояний у женщин;
• для наблюдения женщин после лечения рака шейки матки, предраковых состояний, цервикальной интраэпителиальной неоплазии.

Когда назначается исследование?

• При профилактическом обследовании женщин в возрасте 21-65 лет с интервалом 3 года и в возрасте 30-65 лет с интервалом 5 лет;
• при обследовании женщин с высоким риском онкологических заболеваний, наличием рака шейки матки у родственников, с хроническими воспалительными и инфекционными гинекологическими заболеваниями;
• при обнаружении положительных результатов на инфицирование ВПЧ онкогенных серотипов.
• каждые 6 месяцев в первые два года после лечения рака шейки матки или цервикальной интраэпителиальной неоплазии.

Что означают результаты?

Дается заключение по исследованному материалу с указанием на наличие/отсутствие злокачественного процесса, а также результат – характеристика материала, цитограмма, эпителий, лейкоциты.

Причины повышения:

• плоскоклеточное интраэпителиальное поражение низкой степени тяжести – воспалительные изменения, характерные для инфекции ВПЧ, слабая дисплазия эпителия (CINI);
• плоскоклеточное интраэпителиальное поражение высокой степени тяжести – умеренная дисплазия эпителия (CINII);
• тяжелая дисплазия эпителия и внутриэпителиальный рак шейки матки (CINIII).

Причины понижения:

• отсутствие плоскоклеточных интраэпителиальных поражений, тяжелой дисплазии и плоскоклеточного рака шейки матки – иммуноцитохимическая реакция отрицательная.

Что может влиять на результат?

• Неправильный забор, хранение, транспортировка биоматериала для жидкостной цитологии с последующим иммуноцитохимическим исследованием мазка.
• Использование интравагинальных препаратов, вагинальных кремов, лубрикантов не разрешается за 72 часа до сдачи биоматериала.

Важные замечания

• Для получения информативного мазка и точного результата последующего исследования необходимо следовать рекомендациям по подготовке к тесту.
• Результат исследования интерпретируют с учетом всех значимых клинических, дополнительных лабораторных и инструментальных данных.

Также рекомендуется

[12-001] Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала на атипию

[09-018] Human Papillomavirus 16/18 (HPV 16/18), ДНК [реал-тайм ПЦР]

[09-105] Human Papillomavirus высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типы), ДНК без определения типа [реал-тайм ПЦР]

[40-139] Лабораторные маркеры рака шейки матки

[12-048] Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала - окрашивание по Папаниколау (Рар-тест) (смешанный мазок)

[12-050] Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала - окрашивание по Папаниколау (Рар-тест)

Кто назначает исследование?

Акушер-гинеколог, врач общей практики, онколог, уролог, инфекционист, терапевт.

Литература

• Carozzi F, Gillio-Tos A, Confortini M, Del Mistro A, Sani C, De Marco L, Girlando S, Rosso S, Naldoni C, Dalla Palma P, Zorzi M, Giorgi-Rossi P, Segnan N, Cuzick J, Ronco G; NTCC working group. Risk of high-grade cervical intraepithelial neoplasia during follow-up in HPV-positive women according to baseline p16-INK4A results: a prospective analysis of a nested substudy of the NTCC randomised controlled trial / Lancet Oncol. 2013 Feb;14(2):168-76.
• Roelens J, Reuschenbach M, von Knebel Doeberitz M, Wentzensen N, Bergeron C, Arbyn M. p16INK4a immunocytochemistry versus human papillomavirus testing for triage of women with minor cytologic abnormalities: a systematic review and meta-analysis / Cancer Cytopathol. 2012 Oct 25;120(5):294-307.
• Tsoumpou I, Arbyn M, Kyrgiou M, Wentzensen N, Koliopoulos G, Martin-Hirsch P, Malamou-Mitsi V, Paraskevaidis E. p16(INK4a) immunostaining in cytological and histological specimens from the uterine cervix: a systematic review and meta-analysis / Cancer Treat Rev. 2009 May;35(3):210-20.