Определение мутации гена BRAF в тканях опухолей

Молекулярно-генетическое исследование биоптата опухолевой ткани для определения специфической мутации, которая играет роль в злокачественной трансформации клеток.

Синонимы русские

Генные мутации при меланоме, белок сигнального пути.

Синонимы английские

BRAF Mutation Testing, BRAF Gene Mutation Test, BRAF Gene Mutation Analysis.

Метод исследования

Автоматическое секвенирование.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Биоптат опухолевой ткани в емкости с фиксирующим раствором или парафиновый блок с биоптатом ткани опухоли. Может использоваться как образец первичной опухоли, так и полученный из метастатического очага.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Современные успехи в лечении онкологических заболеваний во многом связаны с обнаружением молекулярных механизмов возникновения и развития злокачественных новообразований, отличающих их от клеток нормальных тканей, и появлением лекарственных препаратов, способных воздействовать на них. Такие лекарства называются таргетными, то есть действующими на определенную "цель" в опухолевой клетке. Они обладают хорошим профилем безопасности, так как, в отличие от стандартной химиотерапии, практически не действуют на нормальные ткани и характеризуются большей эффективностью. Однако назначение таргетных препаратов возможно лишь при обнаружении в опухолевых клетках специфической мишени для их действия. Кроме того, обнаружение в опухолевых клетках определенных генетических аномалий может использоваться как прогностический фактор.

Сравнительно часто патологическим механизмом злокачественной трансформации клеток является нарушение в так называемых сигнальных путях. Сигнальный путь представляет собой цепь, по которой активирующий сигнал от рецептора, располагающегося на поверхности клетки, через несколько внутриклеточных белков передается в ядро. Одним из таких сигнальных путей является МАРК (Mitogen-activated proteinkinase). Внеклеточные сигналы (факторы роста, гормоны), связываясь с рецептором, активируют путь МАРК, что в свою очередь приводит к активации в клеточном ядре генов, ответственных за пролиферацию. Каскад сигнального пути МАРК включает в себя белки четырех семейств: RAS, RAF, MEK и ERK. Семейство RAF представлено тремя белками – ARAF, BRAF и CRAF, – наибольшей активностью из них обладает BRAF. В норме сигнальный путь активируется только через связывание рецептора со специфической молекулой. Однако при возникновении точечных мутаций в генах, кодирующих сигнальные белки, они могут приобретать новые свойства. Так, при определенных мутациях гена BRAF этот белок становится способным активировать сигнальный путь независимо от рецептора и запускать процесс неконтролируемого клеточного деления.

Мутации гена BRAF характерны для меланом кожи (по разным данным, от 30 до 70%), колоректального рака, немелкоклеточного рака легкого (около 3%), а также для папиллярного рака щитовидной железы. Наиболее часто выявляется мутация гена BRAF V600E, вторая по частоте V600K, значительно реже встречаются V600D и V600R. Буквы в обозначении данных мутаций означают замену нормальной аминокислоты (валина) в шестисотом положении белка на другую. После открытия роли мутаций гена BRAF в патогенезе опухолей, в том числе меланомы, были разработаны новые препараты – низкомолекулярные ингибиторы мутированного фермента BRAF. Эли лекарственные средства блокируют патологически активированный сигнальный каскад, который запускается мутацией BRAF V600, и тормозят развитие опухоли. К BRAF-ингибиторам относятся вемурафениб (зелбораф) и дабрафениб.

Материалом для исследования служит ДНК опухолевых клеток. Она может быть выделена из биоптата опухоли, находящегося в парафиновом блоке. Если же на исследование предоставлен образец опухоли в емкости с фиксирующим раствором, из него изготавливаются парафиновые блоки для возможности длительного хранения и использования в последующем для других диагностических тестов.

Для чего используется исследование?

Для определения показаний к назначению низкомолекулярных ингибиторов мутированного фермента BRAF.

Когда назначается исследование?

Пациентам с неоперабельной или метастатической меланомой (стадии IIIC – IV), а также распространенным немелкоклеточным раком легкого при отсутствии мутации гена EGFR.

Что означают результаты?

Положительный результат – мутация обнаружена. Также указывается вид выявленной мутации.
Отрицательный результат – мутации не обнаружены.

Что может влиять на результат?

Нарушение техники фиксации биопсийного материала, которое может привести к деградации генетического материала и невозможности тестирования.

Важные замечания

Воздействие BRAF-ингибиторов на опухолевые клетки с отсутствием мутаций в гене данного белка может, наоборот, сопровождаться патологической активацией каскада RAS-RAF-MEK-ERK и провоцировать рост меланомы. Поэтому исключительно важно проводить диагностику мутационного статуса BRAF. BRAF-ингибиторы не должны назначаться в тех случаях, когда мутация не обнаружена или ее статус достоверно неизвестен.

Также рекомендуется

Цитологическое исследование материала, полученного при оперативном вмешательстве
Цитологическое исследование материала, полученного при эндоскопии (бронхоскопия)
Гистологическое исследование биопсийного материала
Гистологическое исследование доброкачественных образований кожи (папилломы, невусы и др.)
Гистологическое исследование биоптата лимфатического узла (1 узел) с использованием рутинных методик окраски
Определение перестройки гена ALK при раке легкого методом ИГХ

Кто назначает исследование?

Онколог, химиотерапевт.

Литература

Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 23e by Richard A. McPherson MD MSc (Author), Matthew R. Pincus MD PhD (Author). St. Louis, Missouri : Elsevier, 2016. Pages 1512-1513.
The Basic science of Oncology. Fifth edition. Ian F. Tannock, Robert G. Bristow, Richard P. Hill, Lea Harrington. McGrow-Hill Education, 2013. Pages 173-179.
Программа RUSSCO "Совершенствование молекулярно-генетической диагностики в российской федерации". Практическое руководство для врачей. www.cancergenome.ru
Доклад "Современные возможности таргетной терапии НМРЛ", Имянитов Е. Н. Вестник московского онкологического общества, №11 (602), 2013. С. 3-6.