Иммуноцитохимическое исследование соскобов шейки матки с определением белка р16 и Ki-67

Определение экспрессии онкобелка р16 и Ki67 на поверхности эпителиальных клеток для скрининга рака шейки матки с помощью иммуноцитохимического исследования.

Требует предварительного проведения жидкостной цитологии.

Выполняется вместе с исследованием [12-051] "Жидкостная цитология. Исследование соскоба шейки матки и цервикального канала (окрашивание по Папаниколау)" либо при предъявлении стекол с окраской по Папаниколау.

В рамках данного исследования PAP-тест не выполняется.

Синонимы русские

Белок р16, p16^INK4a, онкопротеин, иммуноцитохимическое исследование.

Синонимы английские

P16 protein, p16^INK4a, oncoprotein, immunocytochemical study

Метод исследования

Иммуноцитохимический метод.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок смешанный из цервикального канала и поверхности шейки матки.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить (по согласованию с врачом) использование влагалищных контрацептивов, лекарственных средств, тампонов, спринцевание в течение 48 часов до проведения исследования.
• Женщинам исследование (процедуру взятия урогенитального мазка) рекомендуется проводить с 10-го по 20-й день менструального цикла.
• Исключить половые контакты в течение 2 суток до проведения исследования.
• Исследование не рекомендуется проводить при наличии воспалительных гинекологических заболеваний.
• Нельзя производить взятие урогенитального мазка после обработки шейки матки раствором уксусной кислоты или Люголя.

Общая информация об исследовании

Рак шейки матки занимает третье место среди всех злокачественных заболеваний у женщин в мире и первое место в структуре онкологической заболеваемости женщин 15-40 лет в Российской Федерации. К факторам риска развития рака шейки матки относится инфицирование вирусом папилломы человека (ВПЧ, или HPV) онкогенных серотипов HPV16, HPV18, HPV31, HPV33, HPV35 и др., а также хронические воспалительные гинекологические заболевания, инфекции, семейный онкологический анамнез, случаи рака шейки матки у родственников, иммунодефициты, курение.

В настоящее время основной метод скрининга рака шейки матки и предраковых состояний – цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала по Папаниколау (мазок по Папаниколау, Рар-тест). Несмотря на общедоступность, надежность и широкое применение, данный метод имеет ряд недостатков: отсутствие стандартных методов взятия биоматериала для исследования, что может привести к ложноотрицательным результатам в 20-30 % случаев, вероятность ложноположительных результатов в 5-70 % случаев, проблемы, связанные с повторным взятием материала. Усовершенствованный метод получения мазков с помощью метода жидкостной цитологии позволяет частично преодолеть недостатки традиционного метода. Кроме того, жидкостная цитология дает возможность выполнять молекулярные виды исследования, одним из которых является иммуноцитохимическое исследование.

Иммуноцитохимический метод – это метод молекулярной иммунологической диагностики, позволяющий идентифицировать клеточные и тканевые молекулы-антигены в результате их связывания с антителами и формирования комплекса "антиген – антитело". Он позволяет проводить иммунологический анализ цитологического материала в условиях сохранения морфологии клеток.

В современной диагностике рака шейки матки иммуноцитохимическое исследование позволяет выявлять белок р16 (p16^INK4a), а точнее его экспрессию на поверхности эпителиальных клеток. Исследованию могут быть подвергнуты отдельные мазки из шеечного канала (эндоцервикса) или с наружной поверхности шейки матки (экзоцервикса) или смешанный мазок, полученный при нанесении на одно предметное стекло биоматериала из эндоцервикса и экзоцервикса.

Белок р16 – это клеточный протеин, участвующий в регуляции клеточного цикла и являющийся ингибитором активности циклинзависимой киназы CDK4/6. В норме киназа неактивна и клеточная пролиферация инактивирована за счет прочной связи фактора транскрипции E2F с белком-супрессором рRb. Белок р16 контролирует разобщения комплекса E2F-Rb, не допуская пролиферации клетки. В нормально функционирующих клетках синтез р16 сдерживается по механизму обратной связи и, следовательно, концентрация данного белка чрезвычайно мала, что проявляется негативной иммуноцитохимической реакцией. Онкобелок Е7 ВПЧ с высоким онкогенным риском посредством внутриклеточных механизмов приводит к разобщению комплекса E2F-рRb, активации CDK4/6-киназы, а впоследствии стимулирует чрезмерную клеточную пролиферацию. При этом повышается экспрессия белка р16, что проявляется положительной иммуноцитохимической реакцией мазков клеток.

Иммуноцитохимическое исследование онкобелка р16 позволяет достоверно дифференцировать опухолевую и неопухолевую дисплазии, а также обладает высокой диагностической чувствительностью. Известно, что экспрессия данного белка связана со слабовыраженной (CINI), умеренной (CINII) и резковыраженной дисплазией (CINIII) и внутриэпителиальным раком шейки матки. Он практически не обнаруживается в клетках плоского эпителия без признаков дисплазии (0-2 % случаев).

Таким образом, выявление экспрессии белка р16^INK4a иммуноцитохимическим методом в дополнение к рутинному методу жидкостной цитологии и окраски мазков по Папаниколау позволяет повысить чувствительность теста, выявлять персистирующую папиллома-вирусную инфекцию до появления морфологических изменений, с наибольшей точностью определить риск развития рака шейки матки, своевременно поставить диагноз и назначить лечение.

Ki-67 – антиген раковой опухоли, который можно обнаружить в клетке, когда она делится, но в фазе покоя клеточного цикла он не определяется. Эта особенность Ki-67-маркера служит полезным индикатором прогноза поведения злокачественной опухоли. Тест проводится на образце ткани, полученном из опухоли в результате биопсии или оперативным путем. Тест на Ki-67 не является специфичным для рака молочной железы, он применяется и при других злокачественных заболеваниях, но большая доля исследований по определению его значения как маркера опухоли приходится на этот вид рака. Высокие уровни Ki-67 указывают на агрессивность опухоли и неблагоприятный прогноз.

Ki-67 – отличный индикатор нахождения клетки в фазе подготовки к делению и самого деления (стадии пролиферации). Индекс Ki-67 – соотношение Ki-67-позитивных клеток, то есть находящихся в стадии пролиферации, ко всем клеткам опухоли. Этот показатель коррелирует с клиническим течением рака. Наиболее исследована эта взаимосвязь при карциноме простаты, головного мозга и груди. Для этих опухолей неоднократно было доказано его прогностическое значение в ходе крупных клинических исследований. Так, 5-летняя выживаемость при раке молочной железы при индексе Ki-67 ниже 10 % составляет 95 %, при более высоком уровне падает до 80 %. Другая польза индекса Ki-67 при раке молочной железы – возможность предугадать ответ опухоли на запланированное лечение.

Опухоли груди с высоким процентным содержанием делящихся клеток, соответственно, с высоким уровнем индекса Ki-67, хорошо реагируют на химиотерапевтическое лечение, так как препараты, которые используют при этом виде терапии, убивают клетки только в фазе их деления, поэтому чем выше индекс, тем выше вероятность их эффективности. Зная индекс Ki-67, врач может определить, какое лечение будет адекватно работать в каждой конкретной ситуации.

Для чего используется исследование?

• Для скрининговой диагностики рака шейки матки и предраковых состояний у женщин.
• Для наблюдения за состоянием женщин после лечения рака шейки матки, предраковых состояний, цервикальной интраэпителиальной неоплазии.

Когда назначается исследование?

• При профилактическом обследовании женщин в возрасте 21-65 лет с интервалом 3 года и в возрасте 30-65 лет с интервалом 5 лет.
• При обследовании женщин с высоким риском онкологических заболеваний, наличием рака шейки матки у родственников, с хроническими воспалительными и инфекционными гинекологическими заболеваниями.
• При обнаружении положительных результатов на инфицирование ВПЧ онкогенных серотипов.
• Каждые 6 месяцев первые два года после лечения рака шейки матки или цервикальной интраэпителиальной неоплазии.

Важные замечания

• Для получения информативного мазка и точного результата последующего исследования необходимо следовать рекомендациям по подготовке к тесту.
• Результат исследования интерпретируют с учетом всех значимых клинических, дополнительных лабораторных и инструментальных данных.

Также рекомендуется

• [12-001] Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала на атипию
• [09-018] Human Papillomavirus 16/18 (HPV 16/18), ДНК [реал-тайм ПЦР]
• [08-004] CA 125
• [12-048] Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала - окрашивание по Папаниколау (Рар-тест) (смешанный мазок)
• [12-050] Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала - окрашивание по Папаниколау (Рар-тест)

Кто назначает исследование?

Акушер-гинеколог, врач общей практики, онколог, уролог, инфекционист, терапевт.

Литература

• Carozzi F, Gillio-Tos A, Confortini M, et al, NTCC working group.Risk of high-grade cervical intraepithelial neoplasia during follow-up in HPV-positive women according to baseline p16-INK4A results: a prospective analysis of a nested substudy of the NTCC randomised controlled trial / Lancet Oncol. 2013 Feb;14(2):168-76.
• Roelens J, Reuschenbach M, von Knebel Doeberitz M, et al. p16INK4a immunocytochemistry versus human papillomavirus testing for triage of women with minor cytologic abnormalities: a systematic review and meta-analysis / Cancer Cytopathol. 2012 Oct 25;120(5):294-307.
• Tsoumpou I, Arbyn M, Kyrgiou M, et al. p16(INK4a) immunostaining in cytological and histological specimens from the uterine cervix: a systematic review and meta-analysis / Cancer Treat Rev. 2009 May;35(3):210-20.