Иммуногистохимическая диагностика рецепторного статуса эндометрия (стадия секреции) - стандартное

Исследование гистологических препаратов биопсии эндометрия, проводимое с использованием меченных флюоресцирующими веществами антител, которое позволяет выявить наличие в нем рецепторов стероидных гормонов, а также маркеров определенных иммунокомпетентных клеток, присутствие которых свидетельствует о хроническом воспалительном процессе.

Назначается только при наличии готового гистологического препарата и гистологического заключения.

Необходимо строгое соответствие фазы/стадии цикла данному исследованию.

Синонимы русские

ИГХ рецепторного статуса эндометрия, стандартное (фаза секреции (ER/PR/CD138/CD56)), иммуногистохимическое исследование рецептивности эндометрия "окна имплантации" (количество ER, PGR, СD56, CD138).

Синонимы английские

Immunohistochemical test of endometrial receptivity (routine test).

Метод исследования

Иммуногистохимический метод.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Образец ткани (в парафиновом блоке).

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Эндометрий – это внутренняя часть слизистой оболочки матки, обращенная к ее полости. Его основная функция состоит в создании оптимальных условий для имплантации эмбриона в матку и успешного наступления беременности. Ведущую роль в процессе имплантации играет рецептивность эндометрия – способность воспринимать оплодотворенную яйцеклетку и обеспечивать ее прикрепление и внедрение в полость матки. На рецептивность оказывают влияние изменения эндометрия на тканевом, клеточном и молекулярном уровне.

Соответственно стадиям менструального цикла, эндометрий претерпевает ряд структурных изменений, которые посредством гормональной регуляции синхронизированы с процессами созревания яйцеклетки. Так, к началу лютеиновой фазы, наступающей после овуляции (высвобождения зрелой яйцеклетки), ткань эндометрия значительно утолщается, становится более богатой железами и обильнее кровоснабжается. Структурная перестройка эндометрия контролируется стероидными гормонами яичников – эстрогеном и прогестероном, влияние которых опосредуется через соответствующие рецепторы, располагающиеся на поверхности клеток эндометрия. Достаточный уровень и правильное соотношение рецепторов каждого гормона необходимо для подготовки эндометрия к имплантации эмбриона.

Период времени, когда эндометрий максимально восприимчив к имплантации оплодотворенной яйцеклетки, называется имплантационное окно. Наиболее часто имплантационное окно наступает в период с 5 по 10 дни после овуляции (соответственно 20-24 дни 28-дневного менструального цикла), а его продолжительность составляет не более 48 часов. В этот период происходит взаимодействие эндометрия и эмбриона, которое приводит к имплантации оплодотворенной яйцеклетки и наступлению беременности, в любое другое время эндометрий является нерецептивным и успешная имплантация эмбриона в него невозможна.

Нарушение рецептивности эндометрия в период окна имплантации, а также его взаимодействия с оплодотворенной яйцеклеткой являются причиной бесплодия, невынашивания беременности и неудач схем вспомогательных репродуктивных технологий, в том числе экстракорпорального оплодотворения, при котором, по некоторым данным, более половины неудачных попыток связаны именно с патологией эндометрия.

Значительная роль в генезе эндометриальной дисфункции, сопровождающейся нарушением рецептивности эндометрия, принадлежит хроническому эндометриту. Длительное течение воспалительного процесса в слизистой оболочке тела матки приводит к структурным нарушениям эндометрия и снижению или практически полному отсутствию на его клетках эстрогеновых и прогестероновых рецепторов. Морфологическим субстратом хронического эндометрита являются лимфоидные инфильтраты в слое эндометрия, состоящие из лимфоцитов и плазматических клеток. В последнее время в связи с широким применением противомикробной и противовоспалительной терапии классические гистологические признаки хронического эндометрита выявляются все реже, что может требовать проведения дополнительных методов диагностики, включая иммуногистохимическое исследование.

При адекватном лечении возможно восстановление физиологического состояния эндометрия и успешное наступление беременности. В связи с этим диагностика рецептивного статуса эндометрия и причин его нарушения занимает важное место в определении причин бесплодия и неудачных попыток вспомогательных репродуктивных технологий. Данное исследование включает в себя определение на клетках эндометрия следующих маркеров:

• ER и PR – рецепторы к эстрогену и прогестерону, а также их соотношение (PR/ER);

• CD56 – маркер лимфоцитов, относящихся к классу натуральных киллеров;

• CD138 – маркер плазматических клеток.

Указанные маркеры выявляются посредством иммуногистохимического исследования биоптата эндометрия. Для анализа из готового парафинового блока с помощью специального микроножа нарезают тончайшие срезы, которые затем прикрепляют к предметным стеклам и красят рутинными красителями, чтобы было возможно отличить клетки друг от друга и от межклеточного вещества. Затем срезы на стеклах окрашиваются растворами антител, меченных флюоресцирующими метками, специфичными к одному из исследуемых маркеров. Если на клетках эндометрия присутствует искомый рецептор, антитела связываются с ним и при просмотре стекла под специальным микроскопом можно увидеть флюоресценцию, что будет свидетельствовать о положительном результате теста. Количество применяемых растворов с антителами соответствует количеству маркеров, которые исследуются в образце. Степень флюоресценции и процент клеток, в которых она есть, лежат в основе интерпретации результатов иммуногистохимического анализа.

Для чего используется исследование?

• Для дифференциальной диагностики причин бесплодия и невынашивания беременности, а также неудачных попыток экстракорпорального оплодотворения и других вспомогательных репродуктивных технологий.

Когда назначается исследование?

• При клинических проявлениях дисфункции эндометрия: невынашивании беременности, бесплодии, неудачных попытках ЭКО и других вспомогательных репродуктивных технологий в анамнезе.

Что означают результаты?

Исследование назначается при наличии клинико-анамнестических данных и по результатам предварительно проведенного гистологического исследования.

При интерпретации результатов иммуногистохимического определения экспрессии ER и PR следует оценивать не только процент окрашенных антителами клеток, но и интенсивность окрашивания. Оба эти параметра учитываются в шкале Allred, где процент позитивных клеток оценивается от 0 до 5 баллов, а интенсивность окрашивания от 0 до 3. Сумма двух показателей является итоговым баллом. В заключении также указывается процент клеток, в которых выявлена экспрессия рецепторов к эстрогену и прогестерону, и соотношение количества рецепторов друг к другу.

Степень выраженности хронического эндометрита по маркерам иммунокомпетентных клеток CD138 и CD56 оценивают по количеству позитивных клеток в поле зрения:

• для CD138: 0 клеток – норма, единичные клетки – слабо выраженный, 2-3 – умеренно выраженный, более 5 – выраженный;

• для CD56: до 10 клеток – норма, повышены в два раза – слабо выраженный, повышены в три раза – умеренно выраженный, повышены более чем в 4-5 раз – выраженный.

Результат исследования обязательно содержит интерпретацию полученных данных врачом-патоморфологом. Клиническая интерпретация результатов исследования должна проводиться исключительно врачом соответствующей специальности.

Что может влиять на результат?

Качество предоставленных парафиновых блоков, опыт и квалификация врача-патоморфолога, так как иммуногистохимический метод не в полной мере стандартизирован и оценка его результатов в некоторой степени субъективна.

Важные замечания

• Согласно отдельным рекомендациям, для диагностики хронического эндометрита предлагается выполнять биопсию в первую фазу менструального цикла – на 8-11 дни, когда в эндометрии отмечается наименьшее количество иммунокомпетентных клеток. Однако диагностика рецептивности эндометрия в первую фазу нецелесообразна, поэтому для данного комплексного исследования на рецептивный статус эндометрия и хронический эндометрит биопсию желательно проводить в сроки, указанные в рекомендациях по подготовке к исследованию.
• Для проведения иммуногистохимического исследования необходимо предоставить результат гистологического заключения по предоставленному биологическому материалу, если оно уже выполнялось в другой лаборатории.

• Противопоказаниями к проведению любого вида биопсии эндометрия являются беременность, острые инфекции мочеполовых органов, воспалительные заболевания органов малого таза – половых и мочевыводящих, значительные нарушения свертываемости крови.

Также рекомендуется

• Планирование беременности – здоровье партнеров (для женщин)
• Планирование беременности – здоровье партнеров (для мужчин)
• Планирование беременности – гормональные анализы
• Обследование женщин при планировании ЭКО (2-5 день цикла)
• Гормональные анализы при планировании ЭКО (20-23 день цикла)
• Обследование мужчин при планировании ЭКО
• Панель "Ответ на стимуляцию яичников при ЭКО" – 4 маркера
• Диагностика хронического эндометрита: CD20+, CD56+, CD138+, DP-DQ&DR
• Исследование рецептивности эндометрия: рецепторы к эстрогенам, рецепторы к прогестеронам (в строме и железах эндометрия), Ki-67 (индекс пролиферативной активности), (кроме PTEN)

Кто назначает исследование?

Гинеколог, репродуктолог.

Литература

1. Endometrial receptivity. Aboubakr M. Elnashar, Gamal I. Aboul-Enein. Middle East Fertility Society Journal, Vol. 9, No. 1, 2004. Pages 10-24.
2. Эндометриальная дисфункция: алгоритм гистологического и иммуногистохимического исследования. Г. Х. Толибова, Т. Г. Траль, М. А. Клещёв, И. М. Кветной, Э. К. Айламазян. Журнал акушерства и женских болезней. Выпуск  4, том LXIV, 2015. С. 69-77.
3. Рецептивность эндометрия: молекулярные механизмы регуляции имплантации. Ю. С. Крылова, И. М. Кветной, Э. К. Айламазян. Журнал акушерства и женских болезней. Выпуск 2, том LXII, 2013. С. 63-74.
4. Проблемы коммуникации эмбриона и эндометрия: маркеры нарушений и механизмы влияния. О. А. Мелкозерова, Н. В. Башмакова, А. В. Есарева. Российский вестник акушера-гинеколога, №5, 2016. С. 29-36.