Санкт-Петербург
+7 (812) 309 12 21
+7 (800) 700 03 03

Ваш город Санкт-Петербург?

 

закрыть

Результаты поиска: Количество результатов: 0

Анализы База знаний Акции Страницы Адреса
База знаний в вашем смартфоне или планшете
для iPhone и iPad
для Android
Пересчёт
единиц измерения
Нормы в
микробиологии

← вернуться к списку статей

Версия для печати


[12-120] ГистоFISH анализ всех специфических аберраций на парафиновых срезах

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) – новейший молекулярно-цитогенетический метод исследования, в процессе которого детектируется наличие и локализация специфических ДНК-последовательностей на хромосомах.  В данном исследовании, основанном на методе FISH, выявляются  генетические аберрации, характерные для следующих онкогематологических заболеваний: хронический  лимфолейкоз, MALT-лимфома и лимфома Беркитта.

Синонимы русские

Флуоресцентная гибридизация in situ, молекулярная диагностика онкогематологических заболеваний, хронический лимфолейкоз, лимфома Беркитта, лимфопролиферативные заболевания.

Синонимы английские

Analysis of all specific aberrations on paraffin slides (FISH Histology, quantitative),Lymphoproliferative disorders, Chronic lymphocytic leukemia (CLL), MALT lymphoma, Burkitt's lymphoma.

Метод исследования

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH)

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Образец ткани в парафиновом блоке

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки не требуется. Для исследования используется уже предварительно подготовленный биологический материал (парафиновый блок с образцом биоматериала).

Преимущества исследования

  • Является чувствительным методом для идентификации хромосомных аберраций при количествах лейкозных клеток менее 109 , обеспечивая при этом быстрый анализ большого (>500) числа клеток. Метод обладает высокой точностью для идентификации неизвестных фрагментов хромосомной ДНК.
  • Для исследования могут быть использованы различные биоматериалы – аспираты тонкоугольной аспирационной биопсии, костного мозга, мазки крови, биоптаты, полученные на различных стадиях заболевания;
  • Исследование FISH может быть применено как к метафазным, так и к интерфазным ядрам, то есть к неделящимся клеткам;
  • Позволяет определить даже самые небольшие генетические аномалии, которые нельзя рассмотреть при помощи обычного микроскопа, при использовании соответствующих ДНК-зондов.

Общая информация об исследовании

Анализ с помощью флюоресцентной in situ гибридизации (fluorescence in situ hybridization, FISH) – молекулярно‐цитогенетический метод для идентификации генетических аберраций (отклонений от нормы). Изначально данный метод использовался как исследовательский для выявления наличия или отсутствия специфической ДНК последовательности в хромосомах, но благодаря прогностической и предсказательной ценности был внедрен в клиническую практику.

Метод  основан на использовании флуоресцентно меченых ДНК-зондов, которые представляют собой искусственно синтезированные фрагменты ДНК (олигонуклеотиды), последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. ДНК-зонды различаются по специфичности: для каждой хромосомной аномалии используются свои ДНК-зонды. Также зонды различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие – к конкретному локусу (фрагменту хромосомы или гена).

После специальной процедуры – денатурации – молекула ДНК приобретает вид одноцепочечной нити. ДНК-зонд гибридизуется  (связывается) с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа. Данное состояние интерпретируется как положительный результат FISH-теста. При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-зонды в ходе реакции "отмываются", что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет оценить не только наличие флуоресцентного сигнала, но и его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест – это еще и количественный метод.

FISH имеет широкие возможности в клинической  онкологии для обнаружения хромосомных аномалий в опухолевых клетках. Метод позволяет исследовать генетический состав клетки, как во время митоза, так и в интерфазе. FISH имеет высокую чувствительность – позволяет обнаружить индивидуальные гены, кроме того, в одном препарате могут быть использованы несколько зондов с различными красителями.

FISH-анализ широко применяется при лимфопролиферативных заболеваниях, являясь в ряде случаев определяющим фактором для подтверждения диагноза.

 Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) – самый частый вид лейкозов у взрослых.  Характеризуется пролиферацией и увеличением в периферической крови количества морфологически зрелых лимфоцитов на фоне лимфоцитарной инфильтрации костного мозга, лимфатических узлов, селезенки и других органов. Клеточный субстрат хронического лимфолейкоза представлен  чаще В-популяцией (около 30 %) и значительно реже — Т-лимфоцитами (около 70 %). В-лимфоциты при ХЛЛ не развиваются до плазматических клеток вследствие изменений в клеточном геноме. Это ведет к резкому уменьшению выработки иммуноглобулинов, к которым относятся все антитела.  Заболевание чаще  возникает у лиц старше  65 лет, у 10-15 % больных  в возрасте чуть старше 50 лет. До 40 лет хронический лимфолейкоз возникает крайне редко. Мужчины болеют примерно в 2 раза чаще, чем женщины.

Симптомы обычно развиваются медленно, чаще выявляется случайно при обследовании по поводу других причин. При ХЛЛ наблюдаются следующие симптомы: кровоподтеки (если тромбоциты снижены), увеличение лимфатических узлов, печени или селезенка, чрезмерное потоотделение, ночная потливость, усталость, лихорадка, реинфекции, потеря аппетита, потеря веса.

Лимфома маргинальной зоны, ассоциированная со слизистыми (MALT, mucosa-associated lymphoid tissue) является третьим по распространенности подтипом неходжкинской лимфомы и составляет ~ 7 % всех неходжкинских лимфом. Средний возраст, характерный для выявления  MALT-лимфомы  - 61 год. Это одна из немногих неходжкинских лимфом, которая чаще поражает женщин (соотношение 1,1:1).

 Процесс может возникать в любых экстранодальных зонах (вне лимфатических узлов), но большую часть (85 % всех MALT-лимфом) составляют лимфомы желудка. Далее по частоте поражения следуют околоушные и слюнные железы (18-26 %), легкие (около 14 %), придаточный аппарат глаза (12 %), кожа (11 %), голова и шея (11 %), щитовидная (4-6 %) и молочная железа (2-3 %). Достаточно редко поражаются лимфатические узлы, селезенка или печень. Рецидивы MALT-лимфом часто случаются в других MALT-ассоциированных областях.

Показано, что приблизительно 90 % случаев МАLT-лимфом желудка связано с инфицированием H. рylori. У 70–80 % больных под влиянием эрадикационной (антихеликобактерной) терапии наблюдается регрессия MALT- лимфомы. Дифференциальная диагностику проводят с H. pylori-ассоциированным гастритом.

Лимфома Беркитта — агрессивная форма неходжкинской лимфомы. Развивается из В-лимфоцитов, характерна экстранодальная локализация опухоли, имеет склонность прорастать и распространяться за пределами лимфатической системы – в процесс вовлекается спинномозговая жидкость, кровь и костный мозг. Этиология до сих пор не выявлена. Одним из провоцирующих факторов считается длительная персистенция вируса Эпштейна-Барр в организме. Наиболее часто поражаются органы брюшной полости: тонкая кишка (чаще ее терминальный отдел), брыжейка, а также желудок, толстая кишка, брюшина, печень, селезенка. Специфическое поражение костного мозга наблюдается в 25-35 % случаев, центральной нервной системы - в 20-25 % случаев. Типично вовлечение почек, яичников, яичек, абдоминальных и забрюшинных лимфатических узлов, реже периферических лимфатических узлов. Чаще  развивается у детей (в 30-50 % случаев), подростков и молодых людей (средний возраст 20-25 лет). Выделяют три основных  типа лимфомы Беркитта:

  •   Африканский тип (эндемическая) - встречается в основном в Африке. Установлена связь африканского типа лимфомы с инфекцией вирусом Эпштейна-Барра.
  •   Европейский тип (спорадическая) -  встречается во всем мире, поражает в основном детей и молодежь. Чаще всего опухоль образуется в кишечнике.
  •   Лимфома Беркитта, связанная  с иммунодефицитом - встречается у пациентов с ослабленным иммунитетом, прежде всего у больных СПИДом и у людей после трансплантации органов, которые принимают иммуносупрессоры.

Симптомы варьируются в зависимости от типа: лихорадка, потеря веса, вздутие живота, искажение лицевых костей, ночная потливость, кишечная  непроходимость, увеличенная щитовидная железа, увеличенные миндалины.

Для чего используется исследование?

  • Для уточнения диагноза при подозрении на злокачественное заболевание крови, в том числе при Ph-отрицательных комплексных кариотипах, когда присутствует ген BCR/ABL, определяемый только методом FISH;
  • Для повторного консультирования при подозрении на наличие злокачественного заболевания крови;
  • Для выбора тактики лечения и прогноза заболевания, которые зависят от хромосомного состава опухоли;
  • Чтобы определить наличие или отсутствие конкретной хромосомной аберрации.

Когда назначается исследование?

  • При подозрении на наличие злокачественного заболевания крови, для выбора тактики лечения и оценки прогноза, который зависит от хромосомного состава опухоли.
  • Для подтверждения диагноза при наличии клинических предпосылок: клиническая картина заболевания, изменения гемограммы, наличие специфических синдромов – гиперпластический, геморрагический, анемический и др.);
  • Для контроля "минимальной остаточной болезни" после химиотерапии или пересадки костного мозга.

Что означают  результаты?

Референсные значения:

Отсутствие аберрантных хромосом в исследуемом образце

Хромосомные аномалии, характерные для лимфопролиферативных заболеваний:

Хронический лимфолейкоз

  • перестройки гена ATM;
  • трисомия 12 хромосомы (+12);
  • моносомия, делеция 13 хромосомы –(del(13),-13);
  • делеция ТР53 гена.

 Прогностически значимыми являются следующие аберрации: делеция длинного плеча хромосомы 13 (13q-), трисомия 12 хромосомы, делеция длинного плеча хромосомы 11 (11q-). Делеция короткого плеча хромосомы 17 (17p-) является главным цитогенетическим маркером, непосредственно влияющим на терапевтическую тактику. Рекомендуется проводить скрининг на делецию 17p у всех пациентов, имеющих показания к началу терапии и/или при неэффективности стандартной терапии, особенно пациентам моложе 55 лет, которым может быть проведена аллогенная трансплантация.

 MALT-лимфома

  • транслокация  t(11;18)(q21;q21).
  • транслокация t (14; 18) (q32; q21)

 t(11;18) (q21;q21) - наиболее распространенная хромосомная транслокация, связанная с MALT-лимфомой,  которую не отмечают при других вариантах лимфом. Транслокация t(11;18) ассоциируется с более агрессивным течением.

Второй наиболее частой транслокацией, идентифицированной с  MALT-лимфомой, является t (14;18)(q32; q21).Приблизительно в 4 % MALT-лимфомы желудка и 8 % MALT-лимфомы легких выявляется t(1;14) (p22;q32).Характерным для MALT-лимфом является также нарушение нормальной активности важного супрессора опухоли — гена BCL10, что наблюдается при t(1;14)(p22;q32).

Важно отметить, что лимфомы MALT не несут транслокацию  t (11; 14) (q13; q32), типичную для лимфомы мантийных клеток.

Лимфома Беркитта

  • перестройки С-MYC гена (t(8;14)(q24;q32)t(2;8)(p11;q24)t(8;22)(q24;q11)).

Выявление цитогенетического маркера лимфомы Беркитта – перестройки локуса гена C-MYC и транслокации t(8,14)(q24,q32) или ее вариантов t(2,8)(pl2,q24) или t(8,22)(q24,q11) позволяет диагностировать лимфому Беркитта. Перестройки гена C-MYC выявляется в 100 % случаев лимфомы Беркитта и является одним из главных диагностических критериев этого заболевания. В 80 % случаев встречается t(8;14)(q24;q32) перестройка локусов генов c-myc (8q24) и тяжелых цепей иммуноглобулинов Ig (14q32).

Изменения кариотипа являются независимым прогностическим фактором. При выявлении аберрации (13q-) можно прогнозировать стабильное состояние или медленное течение болезни и благоприятный ответ на терапию, если она является единственной (медиана выживаемости – 11 лет), в то время как остальные аберрации, в особенности (11q- ) и (17p- ) крайне неблагоприятны в прогностическом отношении (медианы выживаемости больных с трисомией 12 – 9,5 лет, ( 11q-) – 6,5 лет, (17p- ) – меньше 3 лет.

Кто назначает исследование?

Гематолог, онколог

Также рекомендуется

[02-043] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)

[02-027] Ретикулоциты

[12-077] Морфологическое исследование трепанобиоптата костного мозга

[20-067] Иммунологическое обследование первичное

Литература

1. Иммуногистохимические методы: Руководство / Ed. by George L. Kumar, Lars Rudbeck.: DAKO / Пер. с англ. под ред. Г.А.Франка и П.Г.Малькова. – М., 2011. – 224 с.

2. Wan TS, Ma ES. Molecular cytogenetics: an indispensable tool for cancer diagnosis. Chang Gung Med J. 2012. Mar-Apr: 35(2): 96-110. Review. PubMed PMID: 22537925.

3. Steven H. Swerdlow Diagnosis of ‘double hit’ diffuse large B-cell lymphoma and B-cell lymphoma, unclassifiable, with features intermediate between DLBCL and Burkitt lymphoma: when and how, FISH versus IHC. Hematology. December 5, 2014 vol. 2014 no. 1 90-99

4. E. Zucca & Dreyling. Минимальные клинические рекомендации ESMOпо диагностике, лечению и наблюдению при MALT- лимфоме желудка. Москва. 2010г.

5. М. Ж. Алексанян, Е. А. Асеева, А. И. Удовиченко, Е. В. Домрачева. Цитогенетические исследования в гематологии. Организационные аспекты. Гематология и трансфузиология, 2012, т. 57, № 4. С.23 – 27.

6. Хронический лимфолейкоз у взрослых. Клинические рекомендации. Национальное гематологическое общество Российское профессиональное общество онкогематологов. 2016г.

7. И.А. Крячок, Е.О. Ульянченко, Т.В. Кадникова, И.Б. Титоренко и др. MALT-лимфома: причины возникновения, патогенез, классификация, клиническая картина.  Клиническая  онкология, № 1 (25), 2017.

Лабораторная служба Хеликс
г. Санкт-Петербург, Б. Сампсониевский пр-т, д. 20
Телефон: +7 (800) 700-03-03