ГистоFISH анализ транслокации t(2;5)(p23;q35) на парафиновых срезах

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) – цитогенетический метод исследования, в процессе которого детектируется наличие и локализация специфических ДНК-последовательностей на хромосомах. Генетический маркер транслокации t(2;5)(p23;q35) образуется вследствие "слияния" (транслокации) генов NPM1 и ALK в клетках-предшественницах кроветворной ткани. В результате этого клетки лимфоидного ростка теряют возможность воспринимать внешние стимулы, регулирующие процесс пролиферации. Анализ наличия транслокации является важнейшей диагностической процедурой при анапластической крупноклеточной лимфоме.

Синонимы русские

Флуоресцентная гибридизация in situ, молекулярная диагностика в онкогематологии, анапластическая крупноклеточная лимфома.

Синонимы английские

Analysis of the translocation t(2;5)(p23;q35) on paraffin slides (FISH Histology, quantitative), molecular diagnostics of oncohematological diseases, anaplastic large cell lymphoma.

Метод исследования

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Образец ткани в парафиновом блоке.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Флюоресцентная гибридизация in situ (fluorescence in situ hybridization, FISH) является молекулярно‐цитогенетическим методом для выявления генетических аберраций (нарушений, ошибок). Широко применяется в клинической практике для диагностики онкогематологических заболеваний, а также для оценки их прогноза и контроля терапии. При проведении анализа используются ДНК-зонды, представляющие собой созданные в лабораторных условиях флуоресцентные (светящиеся) частички ДНК, соответствующие ДНК (нуклеотидным последовательностям) исследуемых хромосом.  Выбор зонда строго специфичен и зависит от конкретной предполагаемой хромосомной аномалии. В процессе реакции происходит связывание ДНК-зонда с подходящим к нему участком хромосомы, затем данный комплекс, имеющий способность к свечению, становится "видимым" для флуоресцентного микроскопа. Таким образом, результат исследования считается положительным. Кроме того, анализ FISH, помимо качественного определения, дает и количественную оценку, которая измеряется интенсивностью свечения и его локализацией. Если в образце материала отсутствуют хромосомы с аномалиями, то ДНК-зонды не видны при помощи микроскопа и тест расценивается как отрицательный.

FISH-анализ является современным, информативным методом, обладающим высокой чувствительностью и специфичностью. При исследовании одного образца материала могут быть применены различные ДНК-зонды, специфичные для различных хромосомных аберраций, что позволяет одновременно проводить диагностику сразу нескольких нарушений. Метод имеет особое значение и находит применение в онкогематологии для выявления лимфопролиферативных заболеваний.

Одним из таких заболеваний является анапластическая крупноклеточная лимфома (АККЛ), которая может быть представлена двумя вариантами в зависимости от наличия определенного белка – киназы анапластической лимфомы (ALK): ALK-положительная АККЛ (AKL+) и ALK-отрицательная АККЛ (ALK-).  Положительный подтип наиболее типичен для детей и лиц молодого возраста, отрицательный – для старшей возрастной группы (40 и более лет). Анапластическая крупноклеточная лимфома проявляется поражением различных групп лимфатических узлов: периферических, медиастинальных, абдоминальных и др. При этом они значительно увеличиваются, имеют мягкую консистенцию, не спаяны с прилежащими тканями, безболезненны. Увеличенные медиастинальные лимфатические узлы могут вызывать кашель, одышку, отечность в области шеи. При вовлечении абдоминальных узлов возможны боли в животе, расстройства работы ЖКТ. Общие симптомы проявляются слабостью, недомоганием, субфебрильной лихорадкой, снижением веса, потливостью. Кроме лимфоузлов, могут поражаться костный мозг, кости, подкожно-жировая клетчатка, селезенка – преимущественно при ALK+, а также ЖКТ, печень, кожа в случае ALK-.

Причины возникновения АККЛ изучены не в полном объеме. Известно, что положительный подтип характеризуется транслокацией t(2;5)(p23;q35), которая ведет к образованию онкогена ALK, имеющего способность запускать опухолевый процесс. Диагноз подтверждается при установлении методом флуоресцентной гибридизации FISH данной хромосомной аномалии. Диагностика ALK-отрицательной АККЛ более затруднительна ввиду отсутствия белка ALK и основана на биопсии с экспрессией антигена CD30, EMA, CD2, CD3, CD5.

Следует отметить, что положительный подтип АККЛ более благоприятен и лучше поддается терапии.

Для чего используется исследование?

• Для уточнения диагноза при подозрении на онкогематологическое заболевание с преимущественным поражением лимфатических узлов;
• для выбора тактики лечения и прогноза заболевания, которые зависят от хромосомного состава опухоли;
• чтобы определить наличие или отсутствие конкретной хромосомной аберрации.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на наличие злокачественного заболевания крови, для выбора тактики лечения и оценки прогноза, который зависит от хромосомного состава опухоли;
• при подтверждении диагноза при наличии клинических предпосылок: клиническая картина заболевания, изменения гемограммы, наличие специфических симптомов;
• при дифференциальной диагностике c карциномой, первичной медиастинальной (тимической) В-крупноклеточной лимфомой (ПМВКЛ) и лимфомой Ходжкина;
• при контроле за "минимальной остаточной болезнью" после химиотерапии или пересадки костного мозга.

Что означают результаты исследования?

Выявляется наличие или отсутствие аберрантных хромосом в исследуемом образце.

В классификации ВОЗ 2008 г. выделяют две нозологические формы: ALK-позитивную анапластическую крупноклеточную лимфому (ALK+) и ALK-негативную анапластическую крупноклеточную лимфому (ALK-), различающиеся по патогенезу, ответу на лечение и прогнозу. Позитивная экспрессия ALK ассоциирована с более благоприятным прогнозом.

ALK+ встречается у детей, подростков и взрослых, характеризуется нодальной локализацией с частым вовлечением костей, костного мозга, подкожно-жировой ткани, селезенки.

Для ALK- свойственно вовлечение желудочно-кишечного тракта, печени, кожи.

Анапластическая крупноклеточная лимфома ALK+ в 90% случаев характеризуется хромосомной транслокацией t(2;5) (p23;q35) с вовлечением гена рецепторной тирозинкиназы - ALK (анапластической лимфомной киназы), локализующегося на хромосоме 2, и гена NPM (нуклефосмина/В23), локализующегося на хромосоме 5. Эта реаранжировка приводит к образованию химерного гена ALK/NPM, который кодирует химерный белок. Наиболее частой аберрацией кариотипа с вовлечением гена ALK является t(2;5) – до 75 – 85% с реаранжировкой ALK.

В остальных 25% случаев отмечают вариабельные реаранжировки с вовлечением гена ALK хромосомы 2 и генов ТРМЗ, ТРМ4, TFG, ATIC, Clathrin, Moesin, MYH9, АЮ17. Например, инверсия хромосомы 2(p23;q35), транслокация t(2;3)(p23;q21) и др.

Кто назначает исследование?

Гематолог, онколог.

Также рекомендуется

[02-043] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)

[12-022] Гистологическое исследование биоптата лимфатического узла (1 узел) с использованием рутинных методик окраски

[12-114] Иммуногистохимическое исследование клинического материала (с использованием 5 антител)

Литература

• Иммуногистохимические методы: Руководство / Ed. by George L. Kumar, Lars Rudbeck.: DAKO / Пер. с англ. под ред. Г.А.Франка и П.Г.Малькова. – М., 2011. – 224 с.
• Krumbholz M, Woessmann W, Zierk J, Seniuk D, Ceppi P, Zimmermann M, Singh VK, Metzler M, Damm-Welk C. Characterization and diagnostic application of genomic NPM-ALK fusion sequences in anaplastic large-cell lymphoma. Oncotarget. 2018 May 29; 9(41):26543-26555.
• Bonzheim I, Steinhilber J, Fend F, Lamant L, Quintanilla-Martinez L. ALK-positive anaplastic large cell lymphoma: an evolving story. Front Biosci (Schol Ed). 2015 Jun 1;7: 248-59.
• Johnson PW, Leek J, Swinbank K, Angus B, Roberts P, Markham AF, Selby PJ, MacLennan KA. The use of fluorescent in situ hybridization for detection of the t(2;5)(p23;q35) translocation in anaplastic large-cell lymphoma.Ann Oncol. 1997; 8 Suppl 2:65-9.
• Jiang X, Zhou D. ALK₊ small cell variant of anaplastic large cell lymphoma with leukemic presentation. Blood. 2018 Apr 12;131(15):1764.