Санкт-Петербург
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) – цитогенетический метод исследования, в процессе которого детектируется наличие и локализация специфических ДНК-последовательностей на хромосомах. Генетический маркер транслокации t(2;5)(p23;q35) образуется вследствие "слияния" (транслокации) генов NPM1 и ALK в клетках-предшественницах кроветворной ткани. В результате этого клетки лимфоидного ростка теряют возможность воспринимать внешние стимулы, регулирующие процесс пролиферации. Анализ наличия транслокации является важнейшей диагностической процедурой при анапластической крупноклеточной лимфоме.
Флуоресцентная гибридизация in situ, молекулярная диагностика в онкогематологии, анапластическая крупноклеточная лимфома.
Синонимы английские
Analysis of the translocation t(2;5)(p23;q35) on paraffin slides (FISH Histology, quantitative), molecular diagnostics of oncohematological diseases, anaplastic large cell lymphoma.
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH).
Образец ткани в парафиновом блоке.
Флюоресцентная гибридизация in situ (fluorescence in situ hybridization, FISH) является молекулярно‐цитогенетическим методом для выявления генетических аберраций (нарушений, ошибок). Широко применяется в клинической практике для диагностики онкогематологических заболеваний, а также для оценки их прогноза и контроля терапии. При проведении анализа используются ДНК-зонды, представляющие собой созданные в лабораторных условиях флуоресцентные (светящиеся) частички ДНК, соответствующие ДНК (нуклеотидным последовательностям) исследуемых хромосом. Выбор зонда строго специфичен и зависит от конкретной предполагаемой хромосомной аномалии. В процессе реакции происходит связывание ДНК-зонда с подходящим к нему участком хромосомы, затем данный комплекс, имеющий способность к свечению, становится "видимым" для флуоресцентного микроскопа. Таким образом, результат исследования считается положительным. Кроме того, анализ FISH, помимо качественного определения, дает и количественную оценку, которая измеряется интенсивностью свечения и его локализацией. Если в образце материала отсутствуют хромосомы с аномалиями, то ДНК-зонды не видны при помощи микроскопа и тест расценивается как отрицательный.
FISH-анализ является современным, информативным методом, обладающим высокой чувствительностью и специфичностью. При исследовании одного образца материала могут быть применены различные ДНК-зонды, специфичные для различных хромосомных аберраций, что позволяет одновременно проводить диагностику сразу нескольких нарушений. Метод имеет особое значение и находит применение в онкогематологии для выявления лимфопролиферативных заболеваний.
Одним из таких заболеваний является анапластическая крупноклеточная лимфома (АККЛ), которая может быть представлена двумя вариантами в зависимости от наличия определенного белка – киназы анапластической лимфомы (ALK): ALK-положительная АККЛ (AKL+) и ALK-отрицательная АККЛ (ALK-). Положительный подтип наиболее типичен для детей и лиц молодого возраста, отрицательный – для старшей возрастной группы (40 и более лет). Анапластическая крупноклеточная лимфома проявляется поражением различных групп лимфатических узлов: периферических, медиастинальных, абдоминальных и др. При этом они значительно увеличиваются, имеют мягкую консистенцию, не спаяны с прилежащими тканями, безболезненны. Увеличенные медиастинальные лимфатические узлы могут вызывать кашель, одышку, отечность в области шеи. При вовлечении абдоминальных узлов возможны боли в животе, расстройства работы ЖКТ. Общие симптомы проявляются слабостью, недомоганием, субфебрильной лихорадкой, снижением веса, потливостью. Кроме лимфоузлов, могут поражаться костный мозг, кости, подкожно-жировая клетчатка, селезенка – преимущественно при ALK+, а также ЖКТ, печень, кожа в случае ALK-.
Причины возникновения АККЛ изучены не в полном объеме. Известно, что положительный подтип характеризуется транслокацией t(2;5)(p23;q35), которая ведет к образованию онкогена ALK, имеющего способность запускать опухолевый процесс. Диагноз подтверждается при установлении методом флуоресцентной гибридизации FISH данной хромосомной аномалии. Диагностика ALK-отрицательной АККЛ более затруднительна ввиду отсутствия белка ALK и основана на биопсии с экспрессией антигена CD30, EMA, CD2, CD3, CD5.
Следует отметить, что положительный подтип АККЛ более благоприятен и лучше поддается терапии.
Что означают результаты исследования?
Выявляется наличие или отсутствие аберрантных хромосом в исследуемом образце.
В классификации ВОЗ 2008 г. выделяют две нозологические формы: ALK-позитивную анапластическую крупноклеточную лимфому (ALK+) и ALK-негативную анапластическую крупноклеточную лимфому (ALK-), различающиеся по патогенезу, ответу на лечение и прогнозу. Позитивная экспрессия ALK ассоциирована с более благоприятным прогнозом.
ALK+ встречается у детей, подростков и взрослых, характеризуется нодальной локализацией с частым вовлечением костей, костного мозга, подкожно-жировой ткани, селезенки.
Для ALK- свойственно вовлечение желудочно-кишечного тракта, печени, кожи.
Анапластическая крупноклеточная лимфома ALK+ в 90% случаев характеризуется хромосомной транслокацией t(2;5) (p23;q35) с вовлечением гена рецепторной тирозинкиназы - ALK (анапластической лимфомной киназы), локализующегося на хромосоме 2, и гена NPM (нуклефосмина/В23), локализующегося на хромосоме 5. Эта реаранжировка приводит к образованию химерного гена ALK/NPM, который кодирует химерный белок. Наиболее частой аберрацией кариотипа с вовлечением гена ALK является t(2;5) – до 75 – 85% с реаранжировкой ALK.
В остальных 25% случаев отмечают вариабельные реаранжировки с вовлечением гена ALK хромосомы 2 и генов ТРМЗ, ТРМ4, TFG, ATIC, Clathrin, Moesin, MYH9, АЮ17. Например, инверсия хромосомы 2(p23;q35), транслокация t(2;3)(p23;q21) и др.
Гематолог, онколог.
[02-043] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)
[12-022] Гистологическое исследование биоптата лимфатического узла (1 узел) с использованием рутинных методик окраски
[12-114] Иммуногистохимическое исследование клинического материала (с использованием 5 антител)