Санкт-Петербург
+7 (812) 309 12 21
+7 (800) 700 03 03

Ваш город Санкт-Петербург?

 

закрыть

Результаты поиска: Количество результатов: 0

Анализы База знаний Акции Страницы Адреса
База знаний в вашем смартфоне или планшете
для iPhone и iPad
для Android
Пересчёт
единиц измерения
Нормы в
микробиологии

← вернуться к списку статей

Версия для печати


[12-124] ГистоFISH анализ перестроек гена ВCL2 на парафиновых срезах

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) – новейший цитогенетический метод исследования, в процессе которого детектируется наличие и локализация специфических ДНК-последовательностей на хромосомах. Генетические маркеры: транслокации t(14;18)(q32;q21), t(2;18)(p11;q21), t(18;22)(q21;q11) образуются вследствие "слияния" (транслокации) гена BCL2 с различными генами в клетках-предшественницах кроветворной ткани. В результате этого клетки лимфоидного ростка теряют возможность отвечать на внешние стимулы запуска механизмов апоптоза. Анализ наличия транслокаций является важнейшей диагностической процедурой при фолликулярной лимфоме.

Синонимы русские

Флуоресцентная гибридизация in situ, молекулярная диагностика онкогематологических заболеваний, фолликулярная лимфома

Синонимы английские

Analysis of the Bcl-2 gene aberrations on paraffin slides (FISH Histology, quantitative), Bcl-2 gene translocation, Follicular Lymphoma

Метод исследования

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH)

Материал для исследования

Образец ткани в парафиновом блоке

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки не требуется. Для исследования используется уже предварительно подготовленный биологический материал (парафиновый блок с образцом биоматериала).

Преимущества исследования

  • Является чувствительным методом для идентификации хромосомных аберраций при количествах лейкозных клеток менее 109 , обеспечивая при этом быстрый анализ большого (>500) числа клеток. Метод обладает высокой точностью для идентификации неизвестных фрагментов хромосомной ДНК.
  • Для исследования могут быть использованы различные биоматериалы – аспираты тонкоугольной аспирационной биопсии, костного мозга, мазки крови, биоптаты, полученные на различных стадиях заболевания;
  • Исследование FISH может быть применено как к метафазным, так и к интерфазным ядрам, то есть к неделящимся клеткам;
  • Позволяет определить даже самые небольшие генетические аномалии, которые нельзя рассмотреть при помощи обычного микроскопа, при использовании соответствующих ДНК-зондов.

Общая информация об исследовании

Анализ с помощью флюоресцентной in situ гибридизации (fluorescence in situ hybridization, FISH) – молекулярно‐цитогенетический метод для идентификации генетических аберраций (отклонений от нормы). Изначально данный метод использовался как исследовательский для выявления наличия или отсутствия специфической ДНК последовательности в хромосомах, но благодаря прогностической и предсказательной ценности был внедрен в клиническую практику.

Метод  основан на использовании флуоресцентно меченых ДНК-зондов, которые представляют собой искусственно синтезированные фрагменты ДНК (олигонуклеотиды), последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. ДНК-зонды различаются по составу  специфичности: для каждой хромосомной аномалии используются свои ДНК-зонды. Также зонды различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие – к конкретному локусу (фрагменту хромосомы или гена).

После специальной процедуры – денатурации – молекула ДНК приобретает вид одноцепочечной нити. ДНК-зонд гибридизуется  (связывается) с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа. Данное состояние интерпретируется как положительный результат FISH-теста. При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-зонды в ходе реакции "отмываются", что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет оценить не только наличие флуоресцентного сигнала, но и его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест – это еще и количественный метод.

FISH имеет широкие возможности в клинической  онкологии для обнаружения хромосомных аномалий в опухолевых клетках. Метод позволяет исследовать генетический состав клетки, как во время митоза, так и в интерфазе. FISH имеет высокую чувствительность – позволяет обнаружить индивидуальные гены, кроме того, в одном препарате могут быть использованы несколько зондов с различными красителями.

FISH-анализ широко применяется при лимфопролиферативных заболеваниях, являясь в ряде случаев определяющим фактором для подтверждения диагноза.

Фолликулярная лимфома (ФЛ) – моноклональная опухоль, развивается из зрелых В-лимфоцитов, происходящих из фолликулярного центра лимфатических узлов.  Является подтипом неходжкинской  лимфомы, занимает второе место в мире по частоте, составляя в среднем 20 % от всех злокачественных лимфопролиферативных заболеваний взрослых. Средний возраст заболевших 60 лет, соотношение заболевших мужчин и женщин приблизительно 1:1,7.

Этиология фолликулярной лимфомы до конца не выяснена. Риск развития фолликулярной лимфомы связывают с длительным лечением иммунодепрессантами. Патологический процесс при фолликулярной лимфоме в большинстве случаев локализуется в лимфатических узлах, характерно безболезненное увеличение лимфоузлов – как периферических, так и висцеральных, реже выявляют поражение селезенки, кольца Пирогова-Вальдейра, ЖКТ, мягких тканей, кожи, причем фолликулярная лимфома кожи является одной из самых частых В-клеточных кожных лимфом.  При поражении костного мозга опухолевые клетки могут определяться и в периферической крови. Другие клинические симптомы, такие как слабость, потливость, снижение веса, анемия, лейкопения и др. редко встречаются в начале заболевания, но могут наблюдаться на более поздних стадиях.

Согласно цитологической  классификации Mann и Berard, предложенной еще в 1892 г.,  выделяют  три типа фолликулярных лимфом. Эта система базируется на подсчете количества центробластов (бластов) в поле зрения при большом увеличении:

  •        тип I - количество бластов менее 5 %,
  •        тип II - количество бластов 5-15 %,
  •        тип III - количество бластов более 15 % (имееет подтипы IIIа и IIIб)

Фолликулярная лимфома I, II и IIIа типов по клиническому течению являются классическими лимфомами, в то время как фолликулярная лимфома IIIб типа (до 10 % всех фолликулярных лимфом) отличается агрессивным течением. Факторами риска при ФЛ являются: мужской пол, пожилой возраст, большая масса опухоли, интоксикационный синдром, инфильтрация костного мозга, повышение лактатдегидрогеназы (ЛДГ) выше 700 Ед/л или повышение уровня р2-микроглобулина.

В 30-50 % случаев происходит трансформация фолликулярной лимфомы. Наиболее часто она трансформируется в диффузную В-крупноклеточную лимфому, реже возникает опухоль, напоминающая лимфому Беркитта, ассоциированную с транслокацией c-MYC.

Согласно последней классификации ВОЗ (2016 г)  в качестве отдельной нозологической формы выделена фолликулярная лимфома детского типа (ФЛДТ). Данное наименование специально присвоено этим опухолям, чтобы отличать их от подобных новообразований, которые могут встречаться  у взрослых. ФЛДТ имеют нодулярный характер поражения с экспансией фолликулов с высокой пролиферативной активностью, в которых выявляются бластоподобные клетки центров фолликулов, а не классические бласты. В ряде случаев у пациентов с лимфомами этого типа не обнаруживается перестройка гена Bcl-2, но определяется некоторый уровень экспрессии белка Bcl-2. В клетках не определяется также перестройка генов Bcl-6 и MYC.

Также согласно новой классификации ВОЗ (2016 г) принято выделять ФЛ дуоденального типа. Данная опухоль, имеющая признаки ФЛ низкой степени злокачественности, отличается от других ФЛ желудочно-кишечного тракта. Она имеет ряд признаков, сходных с таковыми при фолликулярной неоплазии in situ и напоминающих экстранодальную лимфому из клеток маргинальной зоны лимфоидной ткани, ассоциированную со слизистой оболочкой.

Опухолевые клетки фолликулярной лимфомы экспрессируют антигены CD20, CD79а, РАХ-5, CD10, белки Bcl-2, Bcl-6. Уровень экспрессии CD10 и Bcl-6 может быть различным. Фолликулярная лимфома ассоциируется с хромосомной транслокацией гена Bcl-2. Эта хромосомная транслокация приводит к  гиперэкспрессии белка  Bcl-2, что препятствует программируемой клеточной гибели (апоптозу) и повышает выживаемость опухолевых клеток.

Для чего используется исследование?

  • Для уточнения диагноза при подозрении на злокачественное заболевание крови, в том числе при Ph-отрицательных комплексных кариотипах, когда присутствует ген BCR/ABL, определяемый только методом FISH;
  • Для повторного консультирования при подозрении на наличие злокачественного заболевания крови;
  • Для выбора тактики лечения и прогноза заболевания, которые зависят от хромосомного состава опухоли;
  • Чтобы определить наличие или отсутствие конкретной хромосомной аберрации.

Когда назначается исследование?

  • При подозрении на наличие злокачественного заболевания крови, для выбора тактики лечения и оценки прогноза, который зависит от хромосомного состава опухоли;
  • Для подтверждения диагноза при наличии клинических предпосылок: клиническая картина заболевания, изменения гемограммы, наличие специфических синдромов – гиперпластический, геморрагический, анемический и др.);
  • У больных с  фолликулярной лимфомой (ФЛ) для выявления лимфомы высокой степени злокачественности с транслокациями MYC и BCL2 и/или BCL6;
  • Для контроля "минимальной остаточной болезни" после химиотерапии или пересадки костного мозга.

Что означают  результаты?

Референсные значения:

Отсутствие аберрантных хромосом в исследуемом образце.

Около 90 % фолликулярные лимфом характеризуются t(14;18) (q32; q21) транслокацией, затрагивающей ген тяжелой цени иммуноглобулина на 14 хромосоме и Bcl-2 ген на 18 хромосоме. Транслокация встречается также в 20 % случаев  В-крупноклеточных диффузных лимфом и в 1—2 % случаев хронического лимфолейкоза. Выявление гиперэкспрессии белка Bcl-2 на сегодняшний день является обязательным диагностическим признаком и используется  для дифференциального диагноза фолликулярных лимфом.

В 15 % случаев фолликулярной лимфомы. встречается транслокация 3q27. Фолликулярная лимфома с трисомией по хромосоме 3 и транслокацией 3q27-29 является заболеванием с высоким риском и относится к подгруппе фолликулярных лимфом с маргинальной дифференцировкой. К группе высокого риска трансформации также относится фолликулярная лимфома с плазмоцитарной дифференцировкой ("плазмоцитомоподобная лимфома").

Кто назначает исследование?

Гематолог, онколог

Также рекомендуется

[02-043] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)

[02-027] Ретикулоциты

[12-077] Морфологическое исследование трепанобиоптата костного мозга

[16-012] Цитогенетический анализ клеток костного мозга (кариотип)

[07-009] anti-HCV, антитела

[20-067] Иммунологическое обследование первичное

[18-127] FISH анализ перестроек гена BCL-6 (der(3)(q27))

Литература:

1.     Иммуногистохимические методы: Руководство / Ed. by George L. Kumar, Lars Rudbeck.:

DAKO / Пер. с англ. под ред. Г.А.Франка и П.Г.Малькова. – М., 2011. – 224 с.

2.     Wan TS, Ma ES. Molecular cytogenetics: an indispensable tool for cancer diagnosis. Chang Gung Med J. 2012. Mar-Apr: 35(2): 96-110. Review. PubMed PMID: 22537925.

3.     М. Ж. Алексанян, Е. А. Асеева, А. И. Удовиченко, Е. В. Домрачева. Цитогенетические исследования в гематологии. Организационные аспекты. Гематология и трансфузиология, 2012, т. 57, № 4. С.23 – 27.

4.     Фолликулярная  лимфома у взрослых. Клинические рекомендации. Национальное гематологическое общество Российское профессиональное общество онкогематологов. 2016г.

5.     Поддубная И.В. Неходжкинские лимфомы. "Клиническая онкогематология", издание 2-е, Руководство для врачей под ред. проф. Волковой М.А., Москва, Медицина, 2007, стр. 724-770.

Лабораторная служба Хеликс
г. Санкт-Петербург, Б. Сампсониевский пр-т, д. 20
Телефон: +7 (800) 700-03-03