Определение предиктора изменений эндометрия PTEN, Ki-67

PTEN – предиктор неопластических изменений эндометрия, связан с риском развития эндометриоидной аденокарциномы. Исследование экспрессии гена PTEN проводится для оценки степени тяжести эпителиальных повреждений. Исследование экспрессии маркера Ki-67 позволяет подтвердить наличие диспластических процессов, выявить поражения шейки матки с высоким риском дальнейшей прогрессии. Совместное определение двух маркеров дает возможность снизить количество неясных цитологических результатов при диагностике в сложных случаях. Проводится в целях обнаружения предраковых изменений и рака шейки матки и возможности предсказания прогрессии или регрессии CIN.

Синонимы русские

Определение экспрессии Ki-67.

Синонимы английские

Immunocytochemical detection of Ki-67, PTEN, immunocytochemical analysis of PTEN and Ki-67.

Метод исследования

Иммуноцитохимический + жидкостная цитология.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Аспират из полости матки.

Общая информация об исследовании

Стандартное морфологическое исследование эндометрия включает в себя определение клеточного состава, соотношения клеток, фазы менструального цикла, патологических изменений – признаков атипии, инфильтрации воспалительными клетками при световой микроскопии. Материалом для исследования является эндометрий, полученный методом аспирационной биопсии эндометрия или при гистероскопии с биопсией эндометрия, после выскабливания (кюретаж полости матки).

Иммуноцитотохимия – метод исследования клеток, основанный на обнаружении специфических антигенов с помощью присоединения к ним антител, меченных флюорохромом или ферментом. Антигены – это молекулы белков или углеводов, имеющие уникальную трёхмерную структуру, способные индуцировать образование антител. Антитела – иммуноглобулины, распознающие антигены и присоединяющиеся к ним во время реакции "антиген-антитело". Антигены и антитела – это молекулы, неразличимые при исследовании методом световой и электронной микроскопии. Для обнаружения специфических антигенов к образцу клеток добавляют реагент, содержащий меченные флюорохромом или ферментом антитела, в результате чего образуется иммунный комплекс "антиген-антитело". Комплексы формируют специфическое окрашивание клеток и их внутренних структур, обеспечивая детекцию патологических изменений на молекулярном уровне. Иммуноцитохимическое исследование позволяет верифицировать онкологические заболевания, метастатические поражения,  определить их гистологическую принадлежность, оценить экспрессию маркеров, влияющих на прогноз заболевания и подбор схемы эффективной химиотерапии.

Эндометрий – это слизистая оболочка, выстилающая полость матки изнутри, необходимая для имплантации оплодотворенной яйцеклетки и развития плаценты во время беременности. Он подвергается динамическим структурным и функциональным изменениям во время менструального цикла под действием женских половых гормонов. Длительная стимуляция эндометрия эстрогенами, вызванная ановуляцией, ожирением, диабетом, приемом гормонзамещающих препаратов, содержащих эстрогены, синдромом поликистозных яичников, вызывает развитие гиперплазии эндометрия. Гиперплазия эндометрия морфологически определяется как увеличение соотношения эндометриальных желез по отношению к строме. В случаях прогрессирования пролиферации желез формируются атипические клетки с признаками опухолевых. Атипичная гиперплазия связана с повышенным риском развития рака эндометрия.

Рак эндометрия – одно из наиболее распространенных злокачественных новообразований женского полового тракта. Пик заболеваемости раком эндометрия приходится на возраст от 55 до 65 лет. Заболевание может быть бессимптомным в течение определенного периода времени или вызывать маточные кровотечения. 

Методом иммуноцитохимии возможно определение ранних маркеров неопластических изменений клеток эндометрия, что позволяет диагностировать и лечить заболевание на ранних стадиях.

Ki-67 – это ДНК-связывающий ядерный белок, экспрессирующийся в пролиферирующих клетках, который предотвращает разрушение хромосом во время деления. Ki-67 используюется как маркер пролиферации при опухолевых процессах, в некоторых случаях позволяет определить злокачественность процесса, склонность опухоли к метастазированию, прогнозировать ответ на химиотерапию с включением гормональных препаратов. Он присутствует в нормальных клетках эндометрия в пролиферативную фазу и в очень малом количестве в секреторную. В большем количестве белок содержится в стромальных клетках функционального слоя эндометрия.

Определение экспрессии Ki-67 проводится методом иммуноцитохимии. К образцу, содержащему клетки эндометрия, добавляют меченый антиген к белку Ki-67. В результате реакции антиген-антитело формируется специфическое окрашивание ядер клеток. Для анализа выполняется подсчет позитивно меченных клеток, оценка интенсивности окрашивания ядра.

Экспрессия Ki-67 значительно повышается при атипической гиперплазии, раке эндометрия.

PTEN-ген, кодирующий фермент, – супрессор пролиферации клеток, предотвращающий их неконтролируемый рост. Аномалии этого гена приводят к нарушению ингибирования деления клеток, что является одной из причин канцерогенеза. Снижение экспрессии гена PTEN может быть вызвано нарушением генетических процессов – мутации, потеря части хромосомы в момент деления клетки, нарушения транскрипции гена.

Снижение экспрессии PTEN ассоциировано с доброкачественными новообразованиями кожи, раком молочной железы, раком эндометрия, щитовидной железы. Потеря функции PTEN повышает способность рецепторов эстрогена активировать целевые гены, что сопровождается разрастанием клеток эндометрия и эпителия молочной железы.

В случаях когда гиперплазия эндометрия сочетается с низкой экспрессией PTEN, высока вероятность реализации злокачественного потенциала с развитием рака эндометрия. Снижение степени экспрессии PTEN является ранним маркером опухолевых процессов эндометрия.

Детекция PTEN проводится методом иммуноцитохимии. К клеткам эндометрия добавляют антитела к гену PTEN, меченные флюорохромом. В результате реакции антиген-антитело ядра клеток приобретают специфическую окраску. Определение уровня экспрессии PTEN проводится по интенсивности окрашивания ядра.

Выраженность экспрессии гена PTEN находится в обратно пропорциональной зависимости от экспрессии маркера пролиферации Ki-67. При развитии неопластических процессов эндометрия величина экспрессии PTEN снижается, Ki-67 – повышается.

Когда назначается исследование?

• При необходимости подтверждения или исключения хронического эндометрита;
• при утолщении эндометрия по результатам УЗИ;
• при верификации диагноза при гиперплазии эндометрия, миоме матки, эндометриозе, хронических воспалительных заболеваниях;
• при динамическом наблюдении и контроле лечения у пациенток с гиперплазией эндометрия;
• женщинам со злакачественной опухолью молочной железы, принимающим тамоксифен;
• при подозрении на онкологический процесс в шеечной части матки (эрозия, лабораторно подтвержденное инфицирование ВПЧ и др.);
•  в случаях атипической цитологии (кроме инвазивного рака шейки матки), неопределенных цитологических заключениях (атипические клетки плоского эпителия неясного значения) и всех изменениях железистого эпителия;
• при выявлении высокоаномальной кольпоскопической картины, не сопровождающейся изменениями в цитологическом мазке.

Что означают результаты?

Степень экспрессии Ki-67 выражается количественно (в баллах).

Отсутствие позитивно меченных клеток - 0; до 20 % – 1 балл, до 40 % – 2 балла, до 60 % – 3 балла, до 80 % – 4 балла, до 100 % – 5 баллов.

Дополнительно уровень пролиферативной активности оценивается по интенсивности окраски ядер клеток: слабая, умеренная, высокая интенсивность.

Величина экспрессии белка пролиферации Ki-67 находится в обратно пропорциональной зависимости от экспрессии PTEN. Ki-67 увеличивается по мере нарастания неопластических изменений эпителия шейки матки и достигает максимума при цервикальной плоскоклеточной карциноме.

Экспрессия PTEN оценивается по степени интенсивности окрашивания ядер клеток:

PTEN – ++++ выраженная экспрессия;

PTEN – +++ высокая экспрессия;

PTEN – ++ умеренная экспрессия;

PTEN – + низкая экспрессия.

Выявление снижения уровня экспрессии PTEN у больных с гиперплазией эндометрия, особенно на фоне метаболического синдрома, с высокой долей вероятности свидетельствует о повышенном риске развития у них рака эндометрия.

Мутации PTEN (снижение уровня) обнаруживаются более чем в 20 % гиперплазий эндометрия (как с атипией, так и без нее), а также в 30-80 % эндометриоидных карцином, указывая на то, что нарушения в PTEN происходят на относительно ранних стадиях онкогенеза эндометрия.

Также рекомендуется

[12-135] Исследование рецептивности эндометрия: рецепторы к эстрогенам, рецепторы к прогестеронам (в строме и железах эндометрия), Ki-67 (индекс пролиферативной активности), (кроме PTEN)

[12-071] Гистологическое исследование биопсийного материала

[08-057] Антиген плоскоклеточной карциномы (SCCA)

Кто назначает исследование?

Гинеколог, онколог, цитолог.

Литература

1) Techniques of immunohistochemistry: principles, pitfalls, and standardization. Richard W. Cartun, Clive R. Taylor and David J. Dabbs. Diagnostic Immunohistochemistry, Chapter 1, 1–46.

2) Benign Endometrium. David W Kindelberger  and Marisa R Nucci. Gynecologic Pathology: A Volume in the Series: Foundations in Diagnostic Pathology, Chapter 6, 197-232.

3) The Female Genital Tract. Lora Hedrick Ellenson and Edyta C. Pirog.

4) Kruse A.-J., Baak J.P.A., Janssen E.A. et al. Ki-67 predicts progression in early CIN: Validation of a multivariate progression-risk model // Cellular Oncol.- 2004. - Vol. 26. - P. 13 – 20.