Санкт-Петербург
+7 (812) 309 12 21
+7 (800) 700 03 03

Ваш город Санкт-Петербург?

 

закрыть

Результаты поиска: Количество результатов: 0

Анализы База знаний Акции Страницы Адреса
База знаний в вашем смартфоне или планшете
для iPhone и iPad
для Android
Пересчёт
единиц измерения
Нормы в
микробиологии

← вернуться к списку статей

Версия для печати


[12-139] Определение онкопротеина р16ink4a + р53 в качестве уточняющих тестов к первому этапу для определения потенциала дисплазии эпителия

Скрининговое иммуноцитохимическое исследование позволяет выявить экспрессию белка р16ink4a и белка р53 на поверхности эпителиальных клеток слизистой прямой кишки. Хроническая ВПЧ-инфекция может провоцировать развитие анального рака. Канцерогенная роль ВПЧ выявлена в 85% случаев злокачественных опухолей прямой кишки. ДНК ВПЧ обнаруживают в большинстве случаев плоскоклеточного рака. Увеличению риска развития аногенитального рака способствует повреждение двух центральных механизмов канцерогенеза: потеря белка р53 - супрессора опухолевого роста и маркера апоптоза, участвующего в регуляции процессов деления клетки и контроле стабильности генома, а также позитивная экспрессия онкопротеина р16ink4a - маркера инициации канцерогенеза клеток, подвергнутых атаке ВПЧ. Одновременное определение экспрессии белка р16 и антионкогенного белка р53 позволяет с наибольшей точностью диагностировать опухолевую и предопухолевую патологию прямой кишки.

Состав исследования:

  • Определение онкопротеина р16ink4a + р53 в качестве уточняющих тестов к первому этапу для определения
  • Цитологическое исследование клинического материала методом жидкостной цитологии

Синонимы английские

Оncoprotein p16INK4ain.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Соскоб со слизистой прямой кишки.

Метод исследования

Иммуноцитохимический метод + жидкостная цитология.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Перед аноскопией достаточно после стула сделать очистительную клизму, рассчитанную на 1,5-2 литра с прохладной водой.

Общая информация об исследовании

Рак шейки матки - злокачественное новообразование, возникающее в области шейки матки. Гистологически различают две его основные разновидности: аденокарцинома и плоскоклеточный рак. В настоящее время доказана связь заболеваемости вирусом папилломы человека и риском развития рака шейки матки.Данное заболевание наиболее часто встречается у женщин среднего возраста (35-55 лет), в 20% случаев обнаруживается в возрасте старше 65 лет, в молодом возрасте встречается относительно редко. Заболеваемость раком шейки матки значительно превышает заболеваемость другими опухолями женской половой системы. Подробнее о заболевании: https://helix.ru/kb/item/780/.

В большинстве случаев фактором риска развития рака является вирус папилломы человека 16-го и 18-го серотипов. Вирусы данных серотипов ответственны за 65-75% случаев возникновения рака шейки матки. Заражение вирусом папилломы человека происходит преимущественно половым путём. Хотя вирус достаточно быстро уничтожается иммунной системой, и, только если ему удаётся преодолеть иммунную защиту, развивается персистирующее течение заболевания, сопровождающееся изменениями в шейке матки.

В связи со стёртостью клинических проявлений и отсутствием специфической клиники наиболее эффективным методом диагностики являются регулярные гинекологические осмотры, призванные выявить ранние стадии злокачественных новообразований. Скрининговым методом, позволяющим выявить рак шейки матки на разных стадиях развития, является цитологическое исследование. Оно позволяет существенно снизить опасные и смертельные исходы заболевания.

Одной из самых современных методик ранней диагностики предраковых состояний и рака шейки матки является иммуноцитохимическое исследование - определение онкопротеина р16ink4a + р53 для оценки потенциала дисплазии эпителия. Материал берется со всей поверхности шейки матки и из шеечного канала. Так как рак чаще всего развивается в месте соединения плоского эпителия шейки матки с цилиндрическим эпителием цервикального канала, по периметру маточного зева (так называемая зона превращения), соскоб для взятия материала должен обязательно включать эту зону и эпителий шеечного канала.

В данном исследовании применяется современная технология приготовления цитопрепаратов - жидкостная цитология. Важная особенность метода, повышающая качество исследования: исследуемый материал берется в специальный стабилизирующий раствор, который обеспечивает его сохранность без разрушения и потери клеток. При этом весь клеточный материал сохраняет без изменения свои морфологические и иммуноцитохимические свойства. В последние пять лет в разных странах проводилось много исследований, в которых сравнивалась эффективность традиционной техники и жидкостной цитологии с использованием для подтверждения диагнозов гистологической экспертизы как «золотого стандарта» и оценки цитопрепаратов согласно классификации TBS (The Bethesda System). Метод жидкостной  цитологии признан надежным лабораторным тестом, который снижает количество ложноотрицательных результатов, неудовлетворительных для анализа препаратов и время, необходимое цитологу для оценки препарата.

Материал для цитологического исследования получают с поверхности слизистой оболочки. Слизь, присутствующая во взятом материале, мешает перенести на мазок клетки, также материал невозможно равномерно перемешать. При переносе материала на стекло традиционным способом клетки области шейки матки могут не попасть в препарат, подсушивание и потеря прилипших к инструменту клеток значительно снижает диагностическую информативность микропрепаратов. Метод жидкостной цитологии позволяет исключить эти негативные факторы. Преимущество жидкостной цитологии состоит в том, что при взятии материала можно получить до 5-6 «серийных» (то есть одинаковых по клеточному составу) мазков. Это дает возможность применения дополнительных методов исследований. Длительное время таким дополнительным методом было определение ДНК вируса папилломы человека высокого онкогенного риска. Однако в настоящее время известно, что скрининг ВПЧ-инфекции, осуществленный у женщин соответствующего возраста, может идентифицировать пациенток с низким риском развития рака шейки матки в случае негативного теста, но ПЦР ВПЧ бесполезна для обнаружения пациентов с высоким риском прогрессии.

Было доказано, что экспрессия онкопротеина р16ink4a связана с низкой, умеренной и тяжелой дисплазией (по цитологической классификации ВОЗ (CIN I, CIN II и CIN III) и цитологической классификации Бетесда (ASCUS, LSIL и HSIL), причем экспрессия онкопротеина р16ink4a не встречалась в плоском эпителии без признаков дисплазии. В норме кодируемый геном-супрессором белок p16INK4a блокирует вызываемую фактором роста стимуляцию деления клетки за счет угнетения циклин-зависимой киназы, что приводит к нарушению фосфорилирования белка ретинобластомы (БРБ). В этих условиях БРБ связывается с фактором транскрипции Е2F, блокирует его митотическую активность и останавливает деление клетки. Однако при ВПЧ-инфекции встроенная в геном хозяина ДНК вируса начинает синтезировать два онкогена, Е6 и Е7. Онкоген Е7 связывается с белком ретинобластомы, препятствуя ингибированию E2F. Это приводит к неконтролируемому делению клетки и повышенному синтезу белка p16INK4a, что может быть зафиксировано с помощью цитоиммунохимической реакции.

Белок р53 является продуктом гена-супрессора опухоли TP53 и экспрессируется во всех клетках организма. При отсутствии повреждений генетического аппарата белок р53 находится в неактивном состоянии, а при появлении повреждений ДНК активируется. Активация состоит в приобретении способности связываться с ДНК и активировать транскрипцию генов. Результатом активации р53 является остановка клеточного цикла и репликации ДНК; при сильном стрессовом сигнале -запуск апоптоза. Белок р53 активируется при повреждениях генетического аппарата, а также при стимулах, которые могут привести к подобным повреждениям или являются сигналом о неблагоприятном состоянии клетки (стрессовом состоянии). Функция белка р53 состоит в удалении тех клеток, которые являются потенциально онкогенными (отсюда образное название белка р53 - англ. guardian of the genome - "хранитель генома").

В то же время, хотя отмечалась четкая корреляция обнаружения ДНК вируса папилломы человека с дисплазиями, имелось также большое количество ПЦР-позитивных по HPV случаев (с эписомальной локализацией HPV), в которых при последующем гистологическом исследовании отсутствовал предрак и рак. Данное явление подтверждалось негативной иммуноцитохимической реакцией на р16ink4a + р53 в диспластических клетках.

Данное обследование может быть применено не только в диагностике поражения шейки матки, хотя это является наиболее частым и востребованным методом исследования. Оно широко распространено для диагностики и других видов онкологии, таких как рак толстой кишки, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы.

Таким образом, иммуноцитохимическое определение экспрессии онкопротеина р16ink4a + р53 в мазках, приготовленных при помощи жидкостной цитологии, может позволить:

  • достоверно оценивать потенциал дисплазии в отношении развития рака шейки матки и, соответственно, выбирать более консервативную или более агрессивную тактику лечения;
  • уточнять заключения цитолога - дополнительному исследованию на онкопротеина р16ink4a подлежат все случаи атипической цитологии (кроме инвазивного рака шейки матки), неопределенные цитологические заключения (атипические клетки плоского эпителия неясного значения-ASCUS) и все изменения железистого эпителия;
  • разрешать спорные вопросы при выявлении гинекологом высокоаномальной кольпоскопической картины, не сопровождающейся изменениями в цитологическом мазке;
  • во многих случаях обоснованно отказаться от биопсии - у большинства пациенток пожилого возраста с цитологической картиной дисплазии на фоне атрофического цервицита обоснованно избирать выжидательную тактику, отказавшись не только от лечения, но и от биопсий, и увеличить интервалы между диспансерными осмотрами; у небольшого числа р16ink4a-позитивных пациенток этой возрастной группы, напротив, обоснованно избрать более активную тактику;
  • определять индивидуальную тактику в отношении пациенток, инфицированных штаммами вируса папилломы человека  высокого онкогенного потенциала, если у них нет цитологических и кольпоскопических изменений; у женщин с позитивной ПЦР по HPV выделить группу пациенток, у которых уже инициирован канцерогенез в эпителии шейке матки, и направить на них необходимое лечебное воздействие; соответственно, в более многочисленной группе р16ink4a-негативных женщин необходимо продолжить мониторинг;
  • усовершенствовать мониторинг пациенток, прошедших органосохраняющее лечение по поводу «тяжелой дисплазии» или «рака in situ», добавив определение онкопротеина р16ink4a к рутинному цитологическому исследованию, это позволит у пациенток наибольшего риска повысить чувствительность цитологического исследования и тестировать персистирующую папиллома-вирусную инфекцию до появления морфологических изменений;
  • проводить диагностику дисплазии при раке прямой кишки, раке мочевого пузыря, раке предстательной железы и др.

Для чего используется исследование?

  • Обследование женщин независимо от наличия или отсутствия патологии шейки матки;
  • обследование женщин и мужчин при подозрении на рак шейки матки, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы;
  • наличие патологии шейки матки;
  • контроль эффективности лечения патологии шейки матки

Когда назначается исследование?

  • При наличии клинико-анамнестических признаков (эрозия, лабораторно подтвержденное инфицирование ВПЧ), позволяющих заподозрить онкологический процесс в шеечной части матки, мочевого пузыря, прямой кишке;
  • все случаи атипической цитологии (кроме инвазивного рака шейки матки), неопределенные цитологические заключения (атипические клетки плоского эпителия неясного значения) и все изменения железистого эпителия;
  • при выявлении высокоаномальной кольпоскопической картины, не сопровождающейся изменениями в цитологическом мазке;
  • при наблюдении за пациентками, прошедшими органосохраняющее лечение по поводу «тяжелой дисплазии» или «рака in situ» в целях повышения чувствительности цитологического исследования.

Что означают результаты?

Интерпретация заключения проводится в зависимости от выявления онкомаркера р16ink4a и р53.

Для более эффективного выполнения данного скринингового исследования следует проводить целенаправленное обследование в группах риска.

Протокол исследования

Первый этап:

Соскоб со слизистой прямой кишки методом жидкостной цитологии + определение генотипов ВПЧ высокого онкогенного риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68) методом ВПЧ DIGINE-тест.

Второй этап:

Определение онкопротеинов р16ink4a и р53 в качестве уточняющих тестов к первому этапу для определения потенциала дисплазии эпителия (рекомендуется в случае выявления интраэпителиальных изменений).

Экспрессия белка р16 нарастает с увеличением степени дисплазии.

Все доброкачественные изменения железистого эпителия обычно не содержат или экспрессируют в незначительном количестве р53 и р16, в то время как аденокарцинома in situ чаще всего имеет выраженную экспрессию белка р53 (> 10% клеток) и белка р16 (> 25% клеток)1.

В нормально функционирующих клетках концентрация белка р16 чрезвычайно мала, что проявляется негативной иммуноцитохимической реакцией. Белок практически не выявляется в случае отсутствия дисплазии (0-2% случаев).

Экспрессия белка р16 нарастает с увеличением степени дисплазии и выявляется:

  • в 16% случаев при (CIN I) – плоскоклеточном интраэпителиальном поражении низкой степени тяжести – воспалительные изменения, характерные для инфекции ВПЧ, слабая дисплазия эпителия;
  • в 64% при CINII – плоскоклеточное интраэпителиальное поражение высокой степени тяжести – умеренная дисплазия эпителия;
  • в 90% случаев при CINIII – тяжелая дисплазия эпителия и внутриэпителиальный рак шейки матки;
  • в 100% при плоскоклеточном раке шейки матки.

Важные замечания

  • Все доброкачественные изменения железистого эпителия обычно не содержат или экспрессируют в незначительном количестве р53 и р16, в то время как аденокарцинома in situ чаще всего имеет выраженную экспрессию белка р53 (> 10% клеток) и белка р16 (> 25% клеток). Положительный результат исследования является показанием для более тщательного обследования женщины на наличие предраковых поражений шейки матки с помощью гистологического исследования и кольпоскопии.

Кто назначает исследование?

Гинеколог, уролог, онколог, терапевт, хирург, врач общей практики.

Также рекомендуется

  • Иммуноцитохимическое исследование соскобов шейки матки с определением белка р16 и Ki 67 (включая жидкостную цитологию – окрашивание по Папаниколау)
  • Определение риска возникновения и неблагоприятного течения заболевания уротелиального рака мочевого пузыря, определение p16ink4a в осадке мочи
  • Human Papillomavirus 16/18 (HPV 16/18), ДНК [реал-тайм ПЦР]
  • Human Papillomavirus высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типы), ДНК генотипирование [реал-тайм ПЦР]
  • Гистологическое исследование биопсийного материала

Литература

  • Аляутдина О.С., Синицына О.В. ЗНАЧЕНИЕ ТЕСТА НА ОНКОБЕЛОК Р16INK4A В АЛГОРИТМЕ ДИАГНОСТИКИ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. – 2016. – № 11-1. – С. 58-60.
  • Ашрафян Л.А., Харченко Н.В., Огрызкова В.Л., Антонова И.Б. Принципы лечения премикроинвазивного рака шейки матки.// Практическая онкология. — 2002. — Том 3. — С. 173-178;17.
  • Бохман Я.В. Руководство по онкогинекологии./Я.В. Бохман. – С.-Пб. «Фолиант». 2002.
  • Н.В. Данилова, Ю.Ю. Андреева, с соавт. Маркеры апоптоза и белки-регуляторы клеточного цикла при фоновых и предраковых изменениях железистого эпителия шейки матки. Онкология. Журнал им. П.А. Герцена, 1, 2013.
  • Протасова А.Э. Клиническая оценка и фармако-экономический анализ диагностики и лечения основных злокачественных опухолей женских гениталий в амбулаторных условиях.Автореф. дис. д-ра мед. наук. СПб., 2011.
  • Сагайдак В.Н., Комарова Л.Е. Рак шейки матки и цитологический скрининг. – М. 1994.
  • Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. – 2016. – № 11 (часть 1) – С. 58-60.
  • Сергеева Н.С., Маршутина Н.В. Новые серологические и уринологическиеопухолевые маркеры в уточняющей диагностике и мониторинге онкологических больных // Материалы VII Российской онкологической конференции. — М., 2003.
  • Хансон К.П., Имянитов Е.Н. Современные представления о канцерогенезе рака шейки матки.//  Практическая онкология — 2002. — Том 3. — С. 145-155;18.
  • Экспрессия р53 в поверхностных уротелиальных карциномах мочевого пузыря – независимый фактор прогноза. М.В. Ковылина, Е.А. Прилепская, О.А. Цыбуля, Н.В. Тупикина, И.В. Рева.ОНКОУРОЛОГИЯ 2’2016. ТОМ 12.
  • Bibbo M., Klump W.J., DeCecco J., Kovatish A.J. Procedure for immunocytochemical detection of p16INK4A antigen in thin-layer, liquid-based specimens.// ActaCytol. — 2002. — V.46 — P. 25-29;15.
  • Jenison S.A., Yu X.P., Valentine J.M., Galloway D.A. Characterization of human antibody-reactive epitopes encoded by human papillomavirus types 16 and 18. //  J Virol. 1991 — V.65(3) — P. 1208-1218;1.
  • Klaes R., Froedrich T., Spitkovsky D. et al. Overexpression of p16(INK4A) as a specific marker for dysplastic and neoplastic epithelial cells of the cervix uteri.// Int J Cancer. 2001 — V.92(2) — P.276-84;4.
  • Meyer J.L., Hanlon D.W., Andersen B.T. et al. Evaluation of p16INK4a expression in ThinPrep cervical specimens with the CINtec p16INK4a assay: correlation with biopsy follow-up results.// Cancer. — 2007. — V. 111(2). — P. 83-92;20.
  • Nieh S., Chen S.F., Chu T.Y. et al. Expression of p16 INK4A in Papanicolaou smears containing atypical squamous cells of undetermined significance from the uterine cervix. // Gynecol Oncol. — 2003. — V.91(1) — P.201-8;5.
Лабораторная служба Хеликс
г. Санкт-Петербург, Б. Сампсониевский пр-т, д. 20
Телефон: +7 (800) 700-03-03