Иммуноблот антифосфолипидных антител, IgG и IgM

Иммуноблот антифосфолипидных антител – иммунологическое исследование, позволяющее в одном лабораторном тесте провести анализ на несколько аутоантител, ассоциированных с развитием антифосфолипидного синдрома.

Синонимы русские

Иммуноблотинг.

Синонимы английские

APS Immunoblotting, Antiphospholipid Antibodies Assay, Western Blot Analysis for the detection of Antiphospholipid Syndrome.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Антифосфолипидный синдром – аутоиммунное заболевание, клинически характеризующееся артериальными и венозными тромбозами, акушерской патологией (прежде всего – привычное невынашивание беременности в I и II триместрах и преждевременные роды), тромбоцитопенией и связанное с циркуляцией в крови антифисфолипидных антител.

Антифосфолипидные антитела не только являются лабораторным маркером АФС, но и играют ведущую роль в патогенезе его клинических проявлений. АФЛА обладают способностью воздействовать на процессы, составляющие основу регуляции системы свертывания крови, сдвигая равновесие в ней в сторону гиперкоагуляции – то есть тромбообразования. Процесс тромбообразования включает взаимодействие АФЛА с фосфолипидами мембран тромбоцитов, эндотелия (клеток, выстилающих изнутри кровеносные сосуды) и связанными с фосфолипидами плазменными белками. При АФС потенциально могут поражаться сосуды любого калибра – от капиллярного русла до крупных артерий, что обуславливает чрезвычайно разнообразный спектр клинических проявлений заболевания.

Антифосфолипидные антитела представляют собой семейство иммуноглобулинов разных классов (IgA, IgM и IgG), которые распознают определенные участки молекул фосфолипидов. Однако, согласно последним исследованиям, выяснилось, что главными мишенями АФЛА являются не сами фосфолипиды, а связывающиеся с ними белки плазмы, так называемые кофакторы. Комплекс кофактор-фосфолипид формирует новую молекулярную последовательность, к которой вырабатываются специфические антитела.

Таким образом, АФЛА реагируют с гетерогенной группой фосфолипидов и белковых антигенов плазмы крови, к которым относятся:

• фосфолипиды – кардиолипин, фосфатидилсерин, фосфатидилинозитол, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилхолин и фосфатидиловая кислота;
• плазменные белки – "кофакторы"  – β2-гликопротеин I, протромбин, тромбин, протеин S, протеин С, аннексин V.

Повышенный риск развития инфаркта миокарда на фоне АФС был подтвержден после обнаружения в спектре АФЛА антител к окисленным липопротеинам низкой плотности, играющих ведущую роль в патогенезе атеросклероза.

Используемые в настоящее время диагностические критерии антифосфолипидного синдрома, принятые в 2006 году в Сиднее, помимо двух клинических параметров (тромбозы и акушерская патология), включают также три лабораторных признака – волчаночный антикоагулянт (определяется в фосфолипид-зависимых тестах на свертывание крови), а также антитела к кардиолипину и антитела к β2-гликопротеину I классов IgM и IgG, определяемые методом иммуноферментного анализа.

• Антитела к кардиолипину являются основной фракцией АФЛА, их присутствие обычно ассоциировано с развитием тромбозов и тромбоцитопений. Выявление повышенного титра антител к кардиолипину на фоне клинической картины тромбозов является основанием для постановки диагноза "АФС".

• Антитела к β2-гликопротеину I. β2-гликопротеин I – белок сыворотки, обладающий естественной антикоагулянтной активностью. Циркулирующие АФЛА распознают антигенные структуры, формирующиеся при взаимодействии β2-гликопротеина I и кардиолипина. Антитела к кардиолипину и β2-гликопротеину I чаще обнаруживаются у пациентов с первичной формой АФС, а в клинической картине у них преобладают тромбозы глубоких вен и эмболия легочной артерии.

Несмотря на высокую специфичность, применение для диагностики АФС только этих лабораторных критериев не всегда достаточно – тесты могут быть отрицательными при наличии клинических проявлений антифосфолипидного синдрома. Поэтому при наличии у пациента симптомов АФС и отрицательных результатах критериальных лабораторных параметров дополнительно используют определение антител к другим фосфолипидам) и кофакторным белкам.

• Антитела к аннексину V. Роль аннексина V особенно важна для предотвращения тромбообразования в сосудах плаценты. Этот блок представлен во многих тканях, но в основном на эндотелиальных клетках и в плаценте. Аннексин V играет роль в предотвращении свертывания крови, конкурируя с протромбином (фактор свертывания крови) за связывание с фосфатидилсерином на оболочке клеток эндотелия и трофобласта. Молекулы аннексина V формируют блокирующий слой, и на поверхности трофобласта не происходит тромбообразования. У больных АФС антитела к этому белку вытесняют его с поверхности эндотелиоцитов и клеток трофобласта, что приводит к тромбозам сосудов плаценты и потере беременности. Антитела к аннексину V чаще выявляют при вторичном антифосфолипидном синдроме (возникающем на фоне других аутоиммунных заболеваний), соответственно, в клинической картине таких пациенток чаще встречается синдром привычного невынашивания беременности.

• Антитела к протромбину. Наличие этих антител является одной из основных причин тромбозов, прежде всего венозных. У пациентов с АФС повышенный уровень антител класса IgM к протромбину выявляют примерно в 30 %, а  IgG – в 18 % случаев заболевания.

• Антитела к тромбину – один из наиболее чувствительных тестов для диагностики антифосфолипидного синдрома. Наличие этих антител ассоциировано с развитием тромбоэмболических осложнений примерно в 70 % случаев – это самый высокий показатель среди всех маркеров АФС.

Для исследования широкого спектра антифосфолипидных антител используется метод иммунного блотинга. В его основе лежит иммунологическое взаимодействие антитела со специфичным антигеном. Выпускаемые производителем тест-системы для иммуноблота содержат нитроцеллюлозные полоски, на которых фиксированы антигены фосфолипидов и кофакторных белков. На полоску наносят исследуемую сыворотку, при наличии в ней АФЛА они связываются каждый со своим антигеном. Визуализацию образованных иммунных комплексов проводят путем добавления специального фермента и красителя. При наличии в сыворотке антифосфолипидных антител на полоске в зонах, соответствующих отдельным антигенам, появятся окрашенные полосы – так фиксируется положительный результат. Интенсивность окраски полосы можно дополнительно описывать количеством плюсов – это косвенно отражает концентрацию и аффинность (степень сродства) антител.

Для чего используется исследование?

• Для выявления в крови пациента аутоантител, входящих в семейство АФЛА.

Когда назначается исследование?

• При несоответствии клинической картины отрицательным результатам тестов, рекомендованных сиднеевскими лабораторными критериями АФС (волчаночный антикоагулянт, антитела классов IgM и IgG к кардиолипину и β2-гликопротеину I).

Что означают результаты?

Референсные значения

Компонент	Референсные значения, Ед.ОП
Антитела кардиолипину класса IgG	0 – 30
Антитела к кардиолипину класса IgM	0 – 30
Антитела к фосфатидной кислоте класса IgG	0 – 30
Антитела к фосфатидной кислоте класса IgM	0 – 30
Антитела к фосфатидилхолину класса IgG	0 – 30
Антитела к фосфатидилхолину класса IgM	0 – 30
Антитела к фосфатидилэтаноламину класса IgG	0 – 30
Антитела к фосфатидилэтаноламину класса IgM	0 – 30
Антитела к фосфатидилглицеролу класса IgG	0 – 30
Антитела к фосфатидилглицеролу класса IgM	0 – 30
Антитела фосфатидилинозитолу класса IgG	0 – 30
Антитела к фосфатидилинозитолу класса IgM	0 – 30
Антитела к фосфатидилсерину класса IgG	0 – 30
Антитела к фосфатидилсерину класса IgM	0 – 30
Антитела к аннексину V класса IgG	0 – 30
Антитела к аннексину V класса IgM	0 – 30
Антитела к бета-2 гликопротеину класса IgG	0 – 30
Антитела к бета-2 гликопротеину класса IgM	0 – 30
Антитела к протромбину класса IgG	0 – 30
Антитела к протромбину класса IgM	0 – 30

Иммунный блотинг – это качественный тест, он дает ответ в формате "обнаружено" или "не обнаружено". Выявление АФЛА свидетельствует в пользу диагноза "антифосфолипидный синдром", однако положительные результаты должны оцениваться только вместе с клинической картиной.

Что может влиять на результат?

Около 5 % здоровых людей имеют повышенный титр АФЛА, чаще это лица пожилого возраста – с возрастом процент АФЛА-позитивных людей, не страдающих АФС, увеличивается. Частота выявления антифосфолипидных антител увеличивается также у больных воспалительными, аутоиммунными и инфекционными заболеваниями (сифилис, ВИЧ-инфекция, вирусный гепатит С, герпес-вирусная инфекция), злокачественными новообразованиями, а также на фоне приема некоторых лекарственных препаратов (психотропные средства, оральные контрацептивы). Таким образом, любой из лабораторных признаков при отсутствии клинических симптомов не является достаточным условием для постановки диагноза "АФС".

Важные замечания

Помимо первичного антифосфолипидного синдрома, существует также вторичный, возникающий на фоне других заболеваний соединительной ткани. При этом у некоторых пациентов появление признаков АФС может предшествовать появлению симптомов первичного соединительнотканного заболевания (системная красная волчанка, узелковый периартериит, системная склеродермия, ревматоидный артрит). Поэтому при обследовании пациентов с предполагаемым АФС в программу диагностики следует включать определение антинуклеарного фактора в качестве скринингового теста.

Также рекомендуется

• Антитела к кардиолипину, IgG и IgM
• Антитела к β2-гликопротеину I, IgG и IgM
• Волчаночный антикоагулянт
• Антинуклеарный фактор

Кто назначает исследование?

Гематолог, ревматолог, акушер-гинеколог, ангиохирург, пульмонолог, терапевт, врач общей практики.

Литература

1. A Manual of Laboratory and Diagnostic Tests, 9th Edition, by Frances Fischbach, Marshall B. Dunning III. Wolters Kluwer Health, 2015. Page 609.
2. Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 23e by Richard A. McPherson MD MSc (Author), Matthew R. Pincus MD PhD (Author). St. Louis, Missouri : Elsevier, 2016. Page1014.
3. Клиническая лабораторная диагностика: национальное руководство: в 2 т. – T. II / Под ред. В. В. Долгова, В. В. Меньшикова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. С. 96-99, 150-154.