Генетическое установление отцовства/материнства (2 участника: ребенок и предполагаемый родитель)

ДНК-тест на отцовство/материнство позволяет установить, является ли мужчина/женщина биологическим отцом/матерью конкретного ребенка или нет. В основе молекулярно-генетического метода исследования лежит идентификация аллелей ряда полиморфных локусов, уникально наследуемых ребенком от биологических родителей. Исследованию подвергается ДНК, выделенная из биологического материала, полученного от обследуемых лиц. У каждого человека клетки биологического материала (кровь, слюна, кости, кожа, мышцы, зубы, луковицы волос и др.) содержат абсолютно одинаковую ДНК. Она остается постоянной на протяжении всей жизни, не подвергаясь изменениям. Поэтому результаты молекулярно-генетического исследования не зависят от того, какой именно биологический материал исследуется в конкретном случае.
Типирование полиморфных STR-локусов хромосомной ДНК проводят с помощью полимеразной цепной реакции с использованием энзиматической амплификации 25-локусной панели VeriFiler™ Express PCR Amplification Kit (ThermoFisher Scientific, США), руководствуясь методическими указаниями №98/253 "Использование индивидуализирующих систем на основе полиморфизма длины амплифицированных фрагментов (ПДАФ) ДНК в судебно-медицинской экспертизе идентификации личности и установления родства" (утверждены Минздравом РФ 19.01.1999 г.) и инструкциями фирмы-изготовителя.
Выявленные аллели исследованных локусов обозначаются в соответствии со стандартной международной номенклатурой, что позволяет при необходимости проводить межлабораторные сравнения полученных результатов.
Использование образца биологической матери (родство которой не оспаривается) значительно повышает точность анализа.
Возможны два варианта результата анализа: (1) "исключение отцовства/материнства" и (2) "неисключение отцовства/материнства". Вероятность при "неисключении отцовства/материнства" 99,9999 % и выше (точность 100 % при неисключении отцовства/материнства теоретически недостижима). При наличии совпадающих аллелей по всем исследованным локусам у ребенка и предполагаемого отца делается вывод о возможности получения ребенком наследственного материала от обследуемого: "неисключение" отцовства/материнства.
Вероятность при исключении отцовства/материнства составляет 100 %. Вывод об исключении отцовства/материнства делается, если в генотипах ребенка и предполагаемого отца/матери отсутствуют совпадающие аллели даже по отдельным локусам.

При проведении исследования на установление отцовства/материнства анализируются биологические образцы ребенка и предполагаемого отца/матери. Но в некоторых случаях для повышения достоверности результата не исключается привлечение для проведения генетической экспертизы безусловного биологического родителя ребенка.

* 2 участника: ребенок и предполагаемый родитель.

Метод исследования

ПДАФ-анализ STR-локусов ДНК.

Что такое генетическое установление отцовства/материнства?

Установление отцовства/материнства означает доказательство генетическими методами того, что предполагаемый отец ребенка приходится ему биологическим отцом.

Сравнение генетических STR-профилей (STR – Short Tandem Repeats) на основе генотипирования по 16 локусам с использованием наборов AmpFSTR® Profiler Plus® PCR Amplification Kit и GORDIZ CoDIS-18 на автоматическом секвенаторе GE Healthcare Life Sciences MegaBACE 1000. Проводится дополнительное подтверждающее исследование до 20 локусов при полученной недостаточной вероятности. Метод соответствует требованиям, установленным в судебно-медицинской экспертизе. Возможны юридически доказательное или анонимное исследования. Гарантированная вероятность при подтверждении родства: не менее 99,75 %.

Какой материал используется для генетического тестирования?

В качестве материала для проведения анализа можно использовать кровь и соскоб буккального эпителия (клетки слизистой с внутренней стороны щеки). Также можно использовать волос с волосяной луковицей или даже сухое пятно крови, что позволит провести анализ, не подвергая ребенка медицинским манипуляциям. Из собранных биологических образцов выделяется ДНК и исследуется с помощью метода ПЦР (полимеразная цепная реакция). Срок исполнения до 10 суток. Есть возможность провести анализ анонимно.

Тестирование может проводиться в любом возрасте.

Правила наследования генетической информации

1. Ребенок наследует по 2 аллели каждого аутосомного маркера (один от матери, второй от отца)
2. Митохондриальная ДНК наследуется ребенком от матери
3. Ребенок мужского пола наследует отцовский гаплотип по Y-хромосоме

В момент зачатия ребенка происходит слияние яйцеклетки матери и сперматозоида биологического отца, содержащих гаплоидные наборы хромосом (по 23 хромосомы). После оплодотворения эти два гаплоидных набора хромосом формируют диплоидный набор хромосом ребенка (23 пары хромосом). Из них 22 пары аутосом (одинаковых у мужского и женского организма) и две половые хромосомы (Х-хромосома наследуется от матери, а от отца наследуется либо Х-хромосома, либо Y-хромосома). Таким образом, половину генетического материала ребенок получает от матери и другую половину от биологического отца.

Что такое генетическое тестирование?

ДНК-анализ подразумевает непосредственное изучение генетического материала, который ребенок наследует от своих биологических родителей, исходя из теории наследственности Менделя.

Каждая хромосома состоит из ДНК, представляющей собой уникальную для каждого человека последовательность нуклеотидов – генетический код. В последовательности ДНК имеется множество высокополиморфных участков (локусов)  – коротких тандемных повторов (short tandem repeat, STR). Это повторы двух или более пар непосредственно примыкающих друг к другу нуклеотидов. Длина короткого тандемного повтора обычно составляет от 2 до 10 пар оснований (например, (CATG)_n), и количество повторов в локусе очень индивидуально. Для установления родства используется исследование количества STR-повторов в локусе. Выявленные варианты (аллели) сравниваются, и таким образом можно определить, что одна аллель досталась ребенку от матери, а вторая от отца. Если аллель ребенка не совпадает ни с одной из двух аллелей отца, биологическое отцовство полностью исключается. Также учитывается вероятность различия аллелей из-за произошедшей мутации (для STR-локусов вероятность ее возникновения составляет от 0,1 до 0,4 %).

Пример анализа по одному STR-локусу. 1. Совпадения размеров локусов у ребенка и предполагаемого отца. 2. Отсутствие совпадения по исследуемому локусу у ребенка и предполагаемого отца.

Современные методы исследования ДНК позволяют установить родство, анализируя STR-последовательности ядерной ДНК и половых хромосом, а также последовательность нуклеотидов в митохондриальной ДНК (для установления родства по женской линии).

Насколько точен генетический тест?

В геноме ребенка могут присутствовать только такие аллели полиморфных локусов, которые обнаруживаются у матери и биологического отца. Поэтому если у ребенка и отца обнаруживается совпадение как минимум по одному аллелю в каждом исследуемом локусе, можно с вероятностью 99,75-99,99 % подтвердить отцовство. Для достижения такой точности исследуется от 16 до 20 различных локусов. При ответе "не является биологическим отцом" точность теста 100 %.

При анализе трех образцов (мать, ребенок, предполагаемый отец) гарантируется минимальное значение вероятности отцовства 99,9 %. В отсутствие матери (исследуются только образцы отца и ребенка) минимальное гарантированное значение несколько меньше – 99,75 %. То есть ошибка возможна лишь в одном случае из 10 000. Отрицательный ответ точен на 100 %.