Выявление гена RHD плода в крови матери. Резус‑фактор плода

Генетический маркер, используемый для определения резус-фактора плода по фетальной ДНК. Анализ выполняется только с 10-й недели беременности при отрицательном резус-факторе беременной женщины.

Синонимы русские

Выявление наличия/отсутствия 7-го и 10-го экзонов гена RHD; генотипирование гена RHD по фетальной ДНК.

Синонимы английские

Fetal RHD genotyping test.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь беременной женщины с серологическим отрицательным резус-фактором с 10-й недели беременности.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

С точки зрения иммунологии беременность на всём протяжении рассматривается как процесс смены этапных иммунных конфликтов. В основном эти конфликты являются нормальными физиологическими процессами и не только не оказывают патологического воздействия на организм матери и плода, но и помогают нормальному течению беременности. С их помощью реализуются такие этапы беременности, как имплантация плода, формирование гормонального фона беременности и, конечно, сами роды. Кроме того, существует ряд патологических конфликтов, которые могут существенно осложнять течение нормальной беременности, иногда приводя к летальному исходу. Одним из них является резус-конфликт между матерью и плодом.

Система резус (Rh) – одна из самых полиморфных и иммуногенных систем, известных у людей; она представлена группой белковых молекул, расположенных на поверхностной мембране эритроцитов. Наиболее изученными белками (антигенами) этой группы являются антигены D, C, c, E и e, которые кодируются генами RHD и RHCE, расположенными на хромосоме 1. Наличие в геноме гена RHD приводит к появлению на эритроцитах антигена D, что соответствует резус-положительному фенотипу (Rh+). Резус-отрицательный фенотип (Rh-) формируется в результате отсутствия обоих гомологичных аллелей гена RHD.

Важнейший фактор возникновения резус-конфликта при беременности - формирование резус-положительного плода у резус-отрицательной матери. Несмотря на то что кровоток плода и матери разделены плацентой, фрагменты клеток и ДНК плода (фетальная ДНК) могут проходить через неё. Проницаемость плаценты может увеличиваться при ряде патологических процессов: гестоз, заболевания матки, прием лекарственных препаратов, соматическая патология и т.д. При попадании в кровь матери антигенов D плода на них вырабатываются резус-антитела (RhAb). Для матери они безвредны, но, проходя обратно через плаценту, они инициируют развитие гемолитической болезни плода и новорождённого путем связывания с эритроцитами плода и последующим их разрушением. Такие состояния являются фактором риска перинатальной смертности, что подчеркивает необходимость ранних диагностических и превентивных терапевтических стратегий сохранения жизнеспособности плода.

В настоящее время существует два основных метода определения резус-фактора. Первый метод – серологический – подразумевает выявление антигена D на поверхности эритроцитов с помощью специфических антител. Он подходит для широкого рутинного обследования. К существенным ограничениям этого метода относятся: 1) необходимость наличия для исследования живых эритроцитов, что делает невозможным использование его в пренатальной диагностике резус-фактора плода; 2) наличие мутации внутри гена RHD либо изменение уровня его экспрессии. В данных случаях серологическое исследование может дать ложноотрицательный результат (Rh- при наличии гена RHD), так как диагностические антитела не смогут связаться с поврежденными или отсутствующими молекулами антигена D.

Альтернативой серологическому исследованию резус-фактора служит генотипирование на наличие или отсутствие гена RHD. В случае пренатальной диагностики в качестве материала для исследования используется фетальная ДНК, выделенная из крови матери. Генотипирование проводится по нескольким фрагментам (7-й и 10-й экзоны) гена. Необходимое условие, увеличивающим специфичность данного метода, - его использование на сроках 10 и более недель беременности у серологически резус-отрицательных женщин. Основным методом генотипирования в данном случае является полимеразная цепная реакция, выявляющя наличие или отсутствие гена RHD в материале.

С учетом того что концентрация фетальной ДНК в крови матери крайне низкая, а также с учетом возможности наличия серологического ложноотрицательного резус-фактора у матери и наличия мутаций в гене RHD генотипирование резус-фактора плода проводят, исследуя ряд показателей: 1) наличие/отсутствие не менее двух фрагментов (7-й и 10-й экзоны) гена RHD; 2) с учетом сигнала от геномной ДНК матери.

Для чего используется исследование?

• Для прогнозирования развития резус-конфликта между резус-положительным плодом и резус-отрицательной матерью.
• Для решения вопроса о стратегии профилактики гемолитической болезни плода и новорождённого.

Когда назначается исследование?

C 10-й недели беременности.

Что означают результаты?

В процессе исследования формируется четыре типа заключения.

1. Отсутствие обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне достаточного количества сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется отрицательный резус-фактор плода у резус-отрицательной матери. Данное состояние не требует терапевтической коррекции.

2. Наличие обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне высокого количества сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется положительный резус-фактор плода у резус-отрицательной матери. Данное состояние может вызывать резус-конфликт (особенно при повторных беременностях) и требует терапевтической коррекции. Следует отметить, что у матери должен быть серологически подтвержденный отрицательный резус.

3. Наличие обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне равного количества сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется, возможно, положительный генетически резус-фактор у матери, резус-фактор плода идентифицировать не представляется возможным.

4. Наличие слабого сигнала обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне слабого сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется сомнительный результат. Наличие слабого сигнала геномной ДНК, независимо от сигнала с обоих фрагментов гена RHD, либо наличие одного из двух фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне высокого количества сигнала геномной ДНК указывает на недостоверный результат. Во всех этих случаях требуется проведение повторного исследования.

Что может влиять на результат?

• На получение достоверного результата может повлиять наличие у матери серологического ложно-отрицательного результата (Rh- при наличии гена RHD) вследствие наличия мутаций внутри гена RHD либо изменение уровня его экспрессии.
• Срок исследования менее 8-10 недель беременности.
• Малое количество фетальной ДНК, например при патологии плаценты.

Важные замечания

Данное исследование должно проводиться при каждой беременности у резус-отрицательной матери.

Кто назначает исследование?

Акушер-гинеколог, терапевт, гематолог, врач ОВП.

Литература

• Addai-Mensah O, Afriyie EY, Sakyi SA, Obirikorang C, Annani-Akollor ME, Owiredu EW, Amponsah FA, Duneeh RV, Asamoah Adu E. Fetal Rhesus D Genotyping and Sex Determination from Maternal Plasma of Rhesus D-Negative Antenatal Population: The Usefulness of Conventional Polymerase Chain Reaction in Resource-limited Settings. Obstet Gynecol Int. 2020 Oct 16;2020:4913793. doi: 10.1155/2020/4913793.
• Rather RA, Dhawan V, Saha SC. Non-invasive prenatal rhesus D genotyping using cell-free foetal DNA. Indian J Med Res. 2019 Jul;150(1):62-66. doi: 10.4103/ijmr.IJMR_1787_17.
• Arentz-Hansen H, Brurberg KG, Kvamme MK, Stoinska-Schneider A, Hofmann B, Ormstad SS, Fure B. Determination of Fetal Rhesus D Status from Maternal Plasma of Rhesus Negative Women. Oslo, Norway: Knowledge Centre for the Health Services at The Norwegian Institute of Public Health (NIPH); 2014 Dec. Report from Norwegian Knowledge Centre for the Health Services (NOKC) No. 25-2014.