Herpes Simplex Virus 1/2, иммунофлюоресценция

Идентификация вируса простого герпеса 1-го и 2-го типов (Herpes simplex 1/2), основанная на явлении флюоресценции, возникающей при связывании антигена HSV 1/2 и специального реагента (антитела, меченного флюорохромом) и наблюдаемой с помощью флюоресцентной микроскопии.

Синонимы русские

Вирус простого герпеса 1-го и 2-го типа, герпес-вирусная инфекция, ИФ.

Синонимы английские

HSV 1/2, immunofluorescence, immunofluorescence staining, immunofluorescence analysis.

Метод исследования

Иммунофлюоресценция.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок урогенитальный, мазок из носоглотки, мазок с конъюнктивы.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Женщинам рекомендуется сдавать урогенитальный мазок до менструации или через 2-3 дня после ее окончания.
• Мужчинам не следует мочиться в течение 3 часов до сдачи урогенитального мазка.

Общая информация об исследовании

Оба типа простого герпеса (HSV 1/2) относятся к ДНК-содержащим оболочечным вирусам. Они являются самыми распространенными вирусными патогенами и способны вызывать целый спектр заболеваний, в том числе простой пузырьковый лишай ("лабиальный герпес", HSV-1, и "генитальный герпес", HSV 1/2), гингивостоматит и кератоконъюнктивит, а также более тяжелые состояния (энцефалит, диссеминированную герпетическую инфекцию новорождённого). В структуре оболочки HSV 1/2 обнаружены белковые молекулы, обладающие специфическими для этого возбудителя вирулентными и антигенными свойствами (ngB, ngC, ngD и другие). В лабораторной диагностике эти антигены используются для идентификации HSV 1/2. Один из методов их выявления – иммунофлюоресценция.

Иммунофлюоресценция (ИФ) – это иммуногистохимическое исследование, позволяющее выявить антиген возбудителя в образце биоматериала. Она основана на взаимодействии антигена HSV 1/2 и специфического для него антитела, маркированного флюоресцентным красителем (флюорохромом), а также на регистрации флюоресценции при изучении биоматериала в ультрафиолетовом свете. Метод позволяет получить результат в более короткие сроки, чем выделение вируса в культуре клеток, а также характеризуется большей точностью по сравнению с другим распространенным анализом – пробой Цанка с окраской по Райту  –  Гимзе.

Чувствительность ИФ зависит от стадии герпес-вирусной инфекции. Наиболее точный результат будет получен при анализе отделяемого из везикул и "свежих" эрозий. При этом чувствительность теста составляет около 70 %. Обнаружение вируса с помощью ИФ менее вероятно, если отделяемое получено из язвенных дефектов, пустулезных элементов или корок. По этой причине для диагностики герпес-вирусной инфекции с помощью ИФ рекомендуется повторное (многократное) взятие биоматериала. Также чувствительность теста максимальна при взятии отделяемого при самых первых высыпаниях и значительно снижается через 72 часа (составляет 19 %). Наибольшая чувствительность достигается при исследовании образцов, полученных из элементов "генитального герпеса", по сравнению с элементами другой локализации. Необходимо также отметить, что чувствительность теста снижается при анализе биоматериала, взятого на фоне лечения противовирусными препаратами. Учитывая эти особенности, интерпретировать отрицательный результат следует с учетом клинической картины и некоторых других лабораторных данных.

ИФ характеризуется достаточно высокой специфичностью (96-99 %). Это означает, что положительный результат теста позволяет с уверенностью подтвердить диагноз "герпес-вирусная инфекция".

ИФ может быть с успехом применена при обследовании пациентов из группы риска по герпес-вирусной инфекции (например, пациентов, имеющих несколько половых партнеров) и с ее симптомами. Наоборот, не следует использовать метод ИФ при обследовании пациентов без факторов риска (например, девочек препубертатного возраста) и пациентов с бессимптомной инфекцией HSV1/2. Учитывая распространенность бессимптомной инфекции HSV1/2 среди беременных, данный анализ не рекомендован для обследования планирующих беременность и беременных без клинических признаков генитального герпеса.

При подтверждении диагноза "генитальный герпес" с помощью ИФ также рекомендуется обследование на другие инфекции, передаваемые половым путем (гонорею, трихомониаз, хламидиоз и др.). Кроме того, следует обследоваться на ИППП всем половым партнерам пациента.

Для чего используется исследование?

Для диагностики:

• простого пузырькового лишая;
• герпетического гингивостоматита;
• герпетического кератоконъюнктивита.

Когда назначается исследование?

При симптомах:

• "генитального герпеса" у мужчин (сгруппированные везикулезные, эрозивные или язвенные высыпания в области гениталий или бедер, дизурия, дискомфорт в паховой области или промежности);
• "генитального герпеса" у женщин (к описанным симптомам добавляются слизистые выделения из влагалища и диспареуния);
• герпетического кератоконъюнктивита (острое начало болезни, слезотечение, светобоязнь, блефароспазм, инъекции сосудов склеры, интенсивная боль в области пораженного глаза);
• герпетического гингивостоматита (острое начало болезни, лихорадка, отек и эритема десен, болезненная шейная лимфаденопатия, а также везикулезные высыпания в ротовой полости и на коже периоральной области).

Что означают результаты?

Референсные значения

Результат	Интерпретация
Отрицательный	Отсутствие специфического свечения
Положительный (+)	Слабая, неотчетливая флуоресценция
Положительный (++)	Отчетливая флуоресценция умеренной интенсивности
Положительный (+++)	Выраженная флуоресценция высокой интенсивности
Положительный (++++)	Яркая, интенсивная флуоресценция

Причины положительного результата:

• герпес-вирусная инфекция.

Причины отрицательного результата:

• отсутствие герпес-вирусной инфекции.

Что может влиять на результат?

• Применение ацикловира, ганцикловира и фоскарнета могут приводить к ложноотрицательному результату.

Также рекомендуется

• Herpes Simplex Virus 1/2, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Herpes Simplex Virus 1/2, IgM
• Herpes Simplex Virus 1/2, IgG
• Chlamydia trachomatis, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Ureaplasma species, ДНК количественно [реал-тайм ПЦР]
• Trichomonas vaginalis, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Neisseria gonorrhoeae, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Human Papillomavirus высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типы), ДНК генотипирование [реал-тайм ПЦР]
• Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала на атипию
• Интимный – 9 тестов по моче
• Интимный – оптимальный – анализ мазка у женщин
• Интимный – оптимальный – анализ мазка у мужчин

Кто назначает исследование?

Дерматовенеролог, уролог, офтальмолог, ЛОР.

Литература

• Domeika M, Bashmakova M, Savicheva A, Kolomiec N, Sokolovskiy E, Hallen A, Unemo M, Ballard RC; Eastern European Network for Sexual and Reproductive Health (EE SRH Network). Guidelines for the laboratory diagnosis of genital herpes in eastern European countries. Euro Surveill. 2010 Nov 4;15(44).
• Caviness AC, Oelze LL, Saz UE, Greer JM, Demmler-Harrison GJ. Direct immunofluorescence assay compared to cell culture for the diagnosis of mucocutaneous herpes simplex virus infections in children. J Clin Virol. 2010 Sep;49(1):58-60.
• Scicchitano LM, Shetterly B, Bourbeau PP. Evaluation of light diagnostics SimulFluor HSV/VZV immunofluorescence assay. Diagn Microbiol Infect Dis. 1999 Nov;35(3):205-8.
• Lafferty WE, Krofft S, Remington M, Giddings R, Winter C, Cent A, Corey L. Diagnosis of herpes simplex virus by direct immunofluorescence and viral isolation from samplesof external genital lesions in a high-prevalence population. J Clin Microbiol. 1987 Feb;25(2):323-6.
• Schmidt NJ, Gallo D, Devlin V, Woodie JD, Emmons RW. Direct immunofluorescence staining for detection of herpes simplex and varicella-zoster virus antigens in vesicular lesions and certain tissue specimens. J Clin Microbiol. 1980 Nov;12(5):651–5.