Санкт-Петербург
+7 (812) 309 12 21
+7 (800) 700 03 03

Ваш город Санкт-Петербург?

 

закрыть

Результаты поиска: Количество результатов: 0

Анализы База знаний Акции Страницы Адреса
База знаний в вашем смартфоне или планшете
для iPhone и iPad
для Android
Пересчёт
единиц измерения
Нормы в
микробиологии

← вернуться к списку статей

Версия для печати


[12-121] ГистоFISH анализ перестроек гена ВCL6 на парафиновых срезах

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) – новейший цитогенетический метод исследования, в процессе которого детектируется наличие и локализация специфических ДНК-последовательностей на хромосомах. Ген Bсl-6 подавляет гены, участвующие в В-клеточной активации и терминальной дифференцировке лимфоцитов. При диффузной В-крупноклеточной лимфоме в этом гене происходят перестройки, которые полностью блокируют его функцию. В результате, лимфоциты формируют клон опухолевых клеток. Исследование важно как для диагностики диффузной В-крупноклеточной лимфомы, так и для прогноза течения заболевания.

Синонимы русские

Флуоресцентная гибридизация in situ, молекулярная диагностика онкогематологических заболеваний, диффузная В-крупноклеточная лимфома

Синонимы английские

Analysis of the Bcl-6 gene aberrations on paraffin slides (FISH Histology, quantitative), Bcl-6 gene translocation, Diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL).

Метод исследования

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH)

Материал для исследования

Образец ткани в парафиновом блоке

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки не требуется. Для исследования используется уже предварительно подготовленный биологический материал (парафиновый блок с образцом биоматериала).

Преимущества исследования

  • Является чувствительным методом для идентификации хромосомных аберраций при количествах лейкозных клеток менее 109 , обеспечивая при этом быстрый анализ большого (>500) числа клеток. Метод обладает высокой точностью для идентификации неизвестных фрагментов хромосомной ДНК.
  • Для исследования могут быть использованы различные биоматериалы – аспираты тонкоугольной аспирационной биопсии, костного мозга, мазки крови, биоптаты, полученные на различных стадиях заболевания;
  • Исследование FISH может быть применено как к метафазным, так и к интерфазным ядрам, то есть к неделящимся клеткам;
  • Позволяет определить даже самые небольшие генетические аномалии, которые нельзя рассмотреть при помощи обычного микроскопа, при использовании соответствующих ДНК-зондов.

Общая информация об исследовании

Анализ с помощью флюоресцентной in situ гибридизации (fluorescence in situ hybridization, FISH) – молекулярно‐цитогенетический метод для идентификации генетических аберраций (отклонений от нормы). Изначально данный метод использовался как исследовательский для выявления наличия или отсутствия специфической ДНК последовательности в хромосомах, но благодаря прогностической и предсказательной ценности был внедрен в клиническую практику.

Метод  основан на использовании флуоресцентно меченых ДНК-зондов, которые представляют собой искусственно синтезированные фрагменты ДНК (олигонуклеотиды), последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. ДНК-зонды различаются по специфичности: для каждой хромосомной аномалии используются свои ДНК-зонды. Также зонды различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие – к конкретному локусу (фрагменту хромосомы или гена).

После специальной процедуры – денатурации – молекула ДНК приобретает вид одноцепочечной нити. ДНК-зонд гибридизуется  (связывается) с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа. Данное состояние интерпретируется как положительный результат FISH-теста. При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-зонды в ходе реакции "отмываются", что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет оценить не только наличие флуоресцентного сигнала, но и его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест – это еще и количественный метод.

FISH имеет широкие возможности в клинической  онкологии для обнаружения хромосомных аномалий в опухолевых клетках. Метод позволяет исследовать генетический состав клетки, как во время митоза, так и в интерфазе. FISH имеет высокую чувствительность – позволяет обнаружить индивидуальные гены, кроме того, в одном препарате могут быть использованы несколько зондов с различными красителями.

FISH-анализ широко применяется при лимфопролиферативных заболеваниях, являясь в ряде случаев определяющим фактором для подтверждения диагноза.

Диффузная  В-крупноклеточная лимфома (ДВКЛ)  – самый  распространенный вариант  неходжкинской  лимфомы (30-50 % от всех случае). Она является гетерогенной группой лимфатических опухолей с различными клиническими, морфологическими, иммунофенотипическими, цитогенетическими проявлениями. Риск развития опухоли увеличивается с возрастом и значительно выше у людей с серопозитивностью на вирус гепатита С, при наличии вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), при аутоиммунных заболеваниях. У мужчин и женщин ДВКЛ встречается  приблизительно с равной частотой.

Субстратом опухоли являются атипичные В-лимфоидные клетки, для которых характерна экспрессия как общих антигенов В-лимфоцитов, так и антигенов активированных В-лимфоцитов. В большинстве случаев опухолевые клетки располагаются диффузно, но могут быть и разбросанными среди зрелых В-лимфоцитов или формировать очаговые скопления. Очаги опухолевого роста могут располагаться как в лимфоузлах (особенно на шее и в брюшной полости), так и экстранодально (примерно в 30 % случаев) с поражением  ЖКТ, яичек, костей, щитовидной и слюнных желез, кожи, головного мозга. При  ДВКЛ наблюдается высокая предрасположенность к инфильтрирующему росту, что чревато прорастанием сосудов, дыхательных путей и нервов, разрушением костей. Поражение костного мозга в начале заболевания бывает лишь у 10-20 % больных. Важно своевременно выявить заболевание, так как на поздних стадиях возможны метастазы в ЦНС, печень, почки и легкие, а также тяжелое поражение костного мозга.

В патогенезе ДВКЛ наиболее изученным является механизм перестройки гена Bcl-6, который отвечает за активацию одного из механизмов апоптоза. Ген Bcl-6 расположен в локусе 3q27 и экспрессируется исключительно В-клетками зародышевого центра. В физиологических условиях ген Bcl-6 связывается с определенными регулирующими последовательностями ДНК, влияет на транскрипцию других генов, участвующих в В-клеточной активации и терминальной дифференцировке лимфоцитов. При диффузной В-крупноклеточной лимфоме происходит перестройка локуса 3q27, в результате блокируется дифференцировка В-клеток в плазматические клетки, что приводит к бесконтрольной пролиферации В-клеток зародышевого центра и формированию клона опухолевых клеток. Таким образом, исследование перестроек гена важно для диагностики диффузной В-крупноклеточной лимфомы.

Для чего используется исследование?

  • Для уточнения диагноза при подозрении на злокачественное заболевание крови, в том числе при Ph-отрицательных комплексных кариотипах, когда присутствует ген BCR/ABL, определяемый только методом FISH;
  • Для повторного консультирования при подозрении на наличие злокачественного заболевания крови;
  • Для выбора тактики лечения и прогноза заболевания, которые зависят от хромосомного состава опухоли;
  • Чтобы определить наличие или отсутствие конкретной хромосомной аберрации.

Когда назначается исследование?

  • При подозрении на наличие злокачественного заболевания крови, для выбора тактики лечения и оценки прогноза, который зависит от хромосомного состава опухоли;
  • Для подтверждения диагноза при наличии клинических предпосылок: клиническая картина заболевания, изменения гемограммы, наличие специфических синдромов – гиперпластический, геморрагический, анемический и др.);
  • У  больных с диффузной В-крупноклеточной лимфомой (ДВКЛ) для выявления  В-клеточной лимфомы высокой степени злокачественности с транслокациями MYC и BCL2 и/или BCL61;
  • Для контроля "минимальной остаточной болезни" после химиотерапии или пересадки костного мозга

Что означают результаты исследования?

Референсные значения:

Отсутствие аберрантных хромосом в исследуемом образце.

Наиболее агрессивным вариантом В-крупноклеточных опухолей является лимфома с перестройками  нескольких генов: MYC в сочетании с генами BCL2, так называемые "double-hit" (DHL) и/или BCL6 "triple-hit" (THL) лимфомы. Частота выявления этих опухолей составляет 10 % от всех случаев диффузной В-крупноклеточной лимфомы. В качестве возможной причины столь агрессивного поведения опухолей рассматривается синергизм воздействия онкогенов.

В качестве диагностического, прогностического и прогнозирующего биомаркера ген MYC играет ключевую роль в агрессивных В-клеточных лимфомах, а его точное обнаружение важно для  при выборе терапии. Определение транслокаций генов MYC, BCL2 и BCL6 является важным этапом диагностики агрессивных В-клеточных лимфом.

Экспрессия белка MYC при ДВКЛ определяется гораздо чаще (в 30-50 % случаев ДВКЛ), чем транслокации MYC, и ассоциируется с сопутствующей экспрессией BCL2 в 20-35 % случаев. Такие опухоли без транслокаций MYC/BCL2, но с повышенной экспрессией MYC и BCL2 называются "double-expressor" лимфомами (лимфомами с двойной экспрессией).

Отмечается, что прогноз при лимфомах с двойной экспрессией хуже, чем при других ДВКЛ, но они не столь агрессивны, с перестройкой генов MYC и BCL2 и/или BCL6. Эти данные свидетельствуют, что двойная экспрессия белков MYC и BCL2 без изменений генов может быть важным прогностическим фактором при ДВККЛ.

Кто назначает исследование?

Гематолог, онколог

Также рекомендуется

[02-043] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)

[02-027] Ретикулоциты

[12-077] Морфологическое исследование трепанобиоптата костного мозга

[16-012] Цитогенетический анализ клеток костного мозга (кариотип)

[07-009] anti-HCV, антитела

[20-067] Иммунологическое обследование первичное

[18-124] FISH анализ перестроек MYC гена (t(8;14)(q24;q32)t(2;8)(p11;q24)t(8;22)(q24;q11))

 

Литература:

1.     Иммуногистохимические методы: Руководство / Ed. by George L. Kumar, Lars Rudbeck.: DAKO / Пер. с англ. под ред. Г.А.Франка и П.Г.Малькова. – М., 2011. – 224 с.

2.     Wan TS, Ma ES. Molecular cytogenetics: an indispensable tool for cancer diagnosis. Chang Gung Med J. 2012. Mar-Apr: 35(2): 96-110. Review. PubMed PMID: 22537925.

3.     Guoxian Sun, Lya Montella and Min Yang MYC Gene FISH Testing in Aggressive B-Cell Lymphomas: Atypical Rearrangements May Result in Underreporting of Positive Cases. Blood. 2012. 120:1552.

4.     Steven H. Swerdlow Diagnosis of ‘double hit’ diffuse large B-cell lymphoma and B-cell lymphoma, unclassifiable, with features intermediate between DLBCL and Burkitt lymphoma: when and how, FISH versus IHC. American Society of Hematology. Hematology 2014. December 5, 2014 vol. 2014 no. 1 90-99.

5.     М. Ж. Алексанян, Е. А. Асеева, А. И. Удовиченко, Е. В. Домрачева. Цитогенетические исследования в гематологии. Организационные аспекты. Гематология и трансфузиология, 2012, т. 57, № 4. С.23 – 27.

6.     Диффузная В-крупноклеточная лимфома у взрослых. Клинические рекомендации. Национальное гематологическое общество Российское профессиональное общество онкогематологов. 2016г.

Лабораторная служба Хеликс
г. Санкт-Петербург, Б. Сампсониевский пр-т, д. 20
Телефон: +7 (800) 700-03-03