FISH-анализ трисомии 12-й хромосомы (+12)

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) – цитогенетический метод исследования, в процессе которого детектируется наличие и локализация специфических ДНК-последовательностей на хромосомах. Генетический маркер трисомия 12-й хромосомы (+ 12) детектируется в виде наличия в генотипе 3-й "дополнительной" хромосомы 12. Трисомия 12 – частое численное нарушение кариотипа при В-хроническом лимфолейкозе, встречается у 10-15 % больных им и примерно у половины больных с клональными хромосомными нарушениями. Дополнительная хромосома 12 может быть изолированным нарушением или сочетаться с другими нарушениями кариотипа. Наличие дополнительной хромосомы 12 прогностически неблагоприятно.

Синонимы русские

Флуоресцентная гибридизация in situ, молекулярная диагностика онкогематологических заболеваний – хронический лимфолейкоз.

Синонимы английские

Fluorescent in situ hybridization, molecular diagnostics of oncohematological diseases – chronic lymphocytic leukemia.

Метод исследования

Флуоресцентная гибридизация in situ.

Материал для исследования

Венозная кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Подготовки не требуется.

Преимущества исследования

• Является чувствительным методом для идентификации хромосомных аберраций при количествах лейкозных клеток менее 10⁹, обеспечивая при этом быстрый анализ большого (> 500) числа клеток. Метод обладает высокой точностью для идентификации неизвестных фрагментов хромосомной ДНК.
• Исследование FISH может быть применено как к метафазным, так и к интерфазным ядрам, то есть к неделящимся клеткам.
• Позволяет определить даже самые небольшие генетические аномалии, которые нельзя рассмотреть при помощи обычного микроскопа и стандартных окрасок.

Общая информация об исследовании

Анализ с помощью флюоресцентной in situ гибридизации (fluorescence in situ hybridization, FISH) – молекулярно‐цитогенетический метод для идентификации генетических аберраций (отклонений от нормы). Изначально данный метод использовался как исследовательский для выявления специфической ДНК-последовательности в хромосомах, но благодаря прогностической и предсказательной ценности был внедрен в клиническую практику.

Метод основан на использовании флуоресцентно-меченых ДНК-зондов, которые представляют собой искусственно синтезированные фрагменты ДНК (олигонуклеотиды), последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. ДНК-зонды различаются по специфичности – для каждой хромосомной аномалии используются свои ДНК-зонды. Также зонды различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие – к конкретному локусу (фрагменту хромосомы или гена).

После специальной процедуры – денатурации молекула ДНК приобретает вид одноцепочечной нити. ДНК-зонд гибридизуется (связывается) с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа. Данное состояние интерпретируется как положительный результат FISH-теста. При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-зонды в ходе реакции "отмываются", что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет не только выявить флуоресцентный сигнал, но и определить его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест – это еще и количественный анализ.

FISH имеет широкие возможности в клинической онкологии для обнаружения хромосомных аномалий в опухолевых клетках. Исследование определяет генетический состав клетки как во время митоза, так и в интерфазе. FISH имеет высокую чувствительность – позволяет обнаружить индивидуальные гены, кроме того, в одном препарате может быть использовано несколько зондов с различными красителями.

FISH-анализ широко применяется при лимфопролиферативных заболеваниях, являясь в ряде случаев определяющим фактором для подтверждения диагноза.

Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) – наиболее распространенный лейкоз. Он характеризуется широкой клинической гетерогенностью, начиная от пациентов с высокостабильным заболеванием в течение многих лет и заканчивая пациентами с агрессивным течением заболевания. Среди цитогенетических аномалий трисомия 12 (+ 12) возникает примерно в 15–18 % случаев ХЛЛ. У пациентов, у которых она встречается, наблюдается более быстрое прогрессирование заболевания, поражение лимфатических узлов и тенденция к генерализации патологического процесса. Было продемонстрировано, что клетки ХЛЛ, содержащие + 12, характеризуются более низкой экспрессией гена IRF4 по сравнению с другими цитогенетическими группами. Этот ген – регулятор транскрипции генов, выполняющих критические функции в различных типах иммунных клеток. Мутационное повреждение гена IRF4 блокирует развитие апоптоза в опухолевых клетках и вызывает состояние химиорезистентности. Таким образом, трисомия 12 (+ 12) – неблагоприятный прогностический фактор.

Для чего используется исследование?

• Для уточнения диагноза при подозрении на миелодиспластический синдром или острый миелобластный лейкоз.
• Для повторного консультирования при подозрении на злокачественное заболевание крови.
• Для выбора тактики лечения и прогноза заболевания, которые зависят от хромосомного состава опухоли.
• Чтобы определить наличие или отсутствие конкретной хромосомной аберрации.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на злокачественное заболевание крови, для выбора тактики лечения и оценки прогноза, который зависит от хромосомного состава опухоли.
• Для подтверждения диагноза при клинических предпосылках: клиническая картина заболевания, изменения гемограммы, наличие специфических синдромов.
• Для контроля "минимальной остаточной болезни" после химиотерапии или пересадки костного мозга.

Кто назначает исследование?

Гематолог, онколог.

Также рекомендуется

• [02-043] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)
• [02-027] Ретикулоциты
• [16-012] Цитогенетический анализ клеток костного мозга (кариотип)
• [18-115] FISH анализ делеции ТР53 гена
• [18-116] FISH анализ моносомии, делеции 13-й хромосомы – (del(13),-13)

Литература

• Fiorcari S, Maffei R, Atene CG, et al. Notch2 Increases the Resistance to Venetoclax-Induced Apoptosis in Chronic Lymphocytic Leukemia B Cells by Inducing Mcl-1. Front Oncol. 2022 Jan 6;11:777587.
• Pepe F, Rassenti LZ, Pekarsky Y, et al. A large fraction of trisomy 12, 17p-, and 11q- CLL cases carry unidentified microdeletions of miR-15a/16-1. Proc Natl Acad Sci U S A. 2022 Jan 25;119(4).
• Quijano S, López A, Rasillo A, et al. Impact of trisomy 12, del(13q), del(17p), and del(11q) on the immunophenotype, DNA ploidy status, and proliferative rate of leukemic B-cells in chronic lymphocytic leukemia. Cytometry B Clin Cytom. 2008 May;74(3):139-49.