Расширенное иммунологическое обследование

Иммунограмма – специально подобранный обширный комплекс определяемых показателей, позволяющий оценить важные параметры иммунной системы. В ходе анализа определяются состояние и напряженность противовирусного иммунитета, наличие и выраженность аутоиммунного, атопического компонентов в течении различных заболеваний.

Определение содержания основных субпопуляций лимфоцитов, а также углубленный анализ малых популяций В-клеток и расширенный анализ NK-клеток (Natural killers – "натуральные киллеры") в совокупности с результатами анализа основных классов сывороточных иммуноглобулинов, определением циркулирующих иммунных комплексов, клиническим анализ крови, анализом С3, С4 компонентов комплемента позволяет установить более тонкие механизмы иммунологических нарушений. Они проводятся для уточнения степени и глубины поражения иммунной системы и подбора препарата для проведения последующей адекватной иммунокорригирующей терапии, оценки эффективности проводимого лечения, определения прогноза течения заболевания.

* Результаты исследования выдаются с заключением врача – аллерголога-иммунолога, доктора медицинских наук.

Состав исследования:

• Определение содержания основных субпопуляций лимфоцитов, а также углубленный анализ малых популяций В-клеток и расширенный анализ NK-клеток (Natural killers – "натуральные киллеры")
• Определение уровня основных классов иммуноглобулинов в сыворотке крови (IgA, IgE, IgG, IgM)
• Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)
• С3, С4 компоненты комплемента
• Лейкоцитарная формула (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

Синонимы русские

Иммунограмма, иммунофенотипирование, клеточный иммунитет, многоцветный клеточный анализ методом проточной цитометрии.

Синонимы английские

Human Immune System, Immunophenotyping, Multicolor Flow Cytometry Cell Analysis, Human Leukocyte Differentiation Antigens.

Метод исследования

Проточная цитометрия.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как подготовиться к исследованию?

• Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
• Детям в возрасте до 1 года не принимать пищу в течение 30-40 минут до исследования.
• Детям в возрасте от 1 до 5 лет не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования.
• Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
• Полностью исключить (по согласованию с врачом) прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием.
• Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 24 часов до исследования.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

В современном понимании иммунный статус человека – это совокупность лабораторных показателей, характеризующих количественную и функциональную активность клеток иммунной системы в данный момент. Оценка иммунного статуса проводится с помощью иммунологического лабораторного обследования – иммунограммы. Иммунограмма крови не отражает избирательно состояние патологически измененного органа или системы, но позволяет оценить иммунную систему в целом (сум­марный эффект изменения активности иммунной системы в ответ на чужеродный антиген).

Оценка клеточного состава (иммунофенотипирование) лимфоцитов крови человека  - основной компонент в оценке иммунного статуса – выполняется методом проточной цитофлуориметрии.

Иммунофенотипирование - характеристика клеток при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.

Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития. CD антигены (англ. cluster of differentiation antigens) - это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флюоресцентно-меченые моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии произвести подсчёт содержания лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.

В основе проточной цитофлуориметрии лежит проведение фотометрических и флюоресцентных измерений отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.

Метод позволяет не только определить количественное соотношение основных популяций лимфоцитов:

• Т-лимфоциты (CD3⁺CD19^-);
• Т-хелперы/индукторы (CD3⁺CD4⁺CD45⁺);
• Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) (CD3⁺CD8⁺CD45⁺);
• истинные натуральные киллеры (NK-клетки) (CD3^-CD56⁺CD45⁺);
• В-лимфоциты (CD19⁺CD3^-);

- но и оценить малые клеточные популяции, а также изучить их функциональную активность:

• Т-лимфоциты, экспрессирующие маркеры NK-клеток(Т-NK-клетки) (CD3⁺CD56⁺CD45⁺);
• NK-клетки, экспрессирующие α-цепь антигена CD8 (CD3^-СD8⁺CD45⁺);
• NK-клетки цитолитические (CD3^-CD16^+(orhigh) CD56^dimCD45⁺);
• NK-клетки цитокинпродуцирующие (CD3^-CD16^-(orlow) CD56^brightCD45⁺);
• истинные "натуральные киллеры" (NK-клетки) (CD3^-CD16⁺CD45⁺);
• В-1–клетки (CD19⁺CD5⁺CD27^-CD45⁺), связанные продукцией аутоантител;
• активированные В-лимфоциты (CD3^-CD25⁺CD45⁺);
• В-2-клетки (CD19⁺CD5^-CD27^-CD45⁺);
• В-клетки памяти (CD19⁺CD5^-CD27⁺CD45⁺);
• активированные Т-лимфоциты (CD3⁺HLA-DR⁺CD45⁺) и активированные цитотоксические лимфоциты (CD8⁺HLA-DR⁺CD45⁺);
• В-лимфоциты и активированные NK-клетки (CD3^-HLA-DR⁺CD45⁺);
• активированные Т-лимфоциты, экспрессирующие a-цепь рецептора ИЛ-2 (CD3⁺CD25⁺CD45⁺);
• регуляторные Т-хелперные клетки (CD4⁺CD25^brightCD45⁺), выполняющие иммуносупрессорную функцию.

Такое всестороннее изучение клеточного состава лимфоцитов в совокупности с результатами анализа основных классов сывороточных иммуноглобулинов, определением циркулирующих иммунных комплексов, клиническим анализ крови, анализом С3, С4 компонентов комплемента позволяет установить более тонкие механизмы иммунологических нарушений. Они проводятся для уточнения степени и глубины поражения иммунной системы и подбора препарата для проведения последующей адекватной иммунокорригирующей терапии, оценки эффективности проводимого лечения, определения прогноза течения заболевания.

Когда назначается исследование?

Рекомендовано для комплексного обследования пациентов, входящих в  группу риска по аутоиммунному иммунопатологическому синдрому. Это пациенты с такими заболеваниями, как:

• ревматоидный артрит;
• рассеянный склероз;
• диффузные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, дерматомиозит);
• аутоиммунный тиреоидит;
• неспецифический язвенный колит и т.д.

Что означают результаты?

Изменения различных клеточных популяций лимфоцитов в сторону повышения или понижения развиваются при различных патологических процессах в организме, таких как инфекции, аутоиммунные и онкологические заболевания, иммунодефициты, в постоперационном периоде, при трансплантации органов.

Ниже представлена таблица с клиническими ситуациями, которые могут приводить к изменениям в субпопуляционном составе лимфоцитов.

Субпопуляция лимфоцитов	Повышение показателя	Снижение показателя
T-лимфоциты (CD3+CD19-)	• Острые и хронические инфекции; • гормональный дисбаланс; • длительный прием лекарственных препаратов (особенно монотерапия); • прием биологически активных добавок; • интенсивные занятия спортом; • беременность; • Т-клеточные лейкозы.	• Некоторые виды инфекций; • иммунодефицитные состояния; • алкогольный цирроз печени; • карцинома печени; • аутоиммунные заболевания; • прием иммуносупрессивных препаратов.
Т-хелперы (CD3+CD4+CD45+)	• Ряд аутоиммунных заболеваний; • гормональный дисбаланс; • некоторые инфекции; • отдельные Т-клеточные лейкозы; • отравление солями бериллия.	• Иммунодефицитные состояния (основной лабораторный признак вторичного иммунодефицита); • алкогольная болезнь печени; • аутоиммунные заболевания; • прием иммуносупрессивных препаратов или стероидов.
Т-цитотоксические лимфоциты (CD3+CD8+CD45+)	• Некоторые вирусные инфекции; • ряд Т-клеточных лейкозов; • наркоз; • острая фаза аллергии; • ряд аутоиммунных патологий.	• Некоторые виды аутоиммунных, аллергических заболеваний; • иммуносупрессивная терапия.
Активированные Т-лимфоциты (CD3+HLA-DR+CD45+)	• Инфекции; • аутоиммунная патология; • аллергия; • онкологические заболевания; • алкогольный цирроз печени; • беременность.	Не имеют диагностического значения.
В-лимфоциты (CD19+CD3-)	• Ряд аутоиммунных патологий; • стресс; • В-клеточные лимфомы; • длительная экспозиция формальдегидом.	• Гипореактивность, перераспределение в очаги воспаления; • общий вариабельный иммунодефицит; • наследственные иммунодефициты; • внутривенное введение иммуноглобулинов; • алкогольный цирроз печени.
"Натуральные киллеры" (CD3-CD56+CD45+), (CD3-CD16+CD45+)	• Фаза восстановления после вирусных инфекций (гепатит В, С); • ряд аутоиммунных заболеваний; • онкологические заболевания; • беременность; • алкогольный цирроз печени.	• Ряд инфекций; • ряд аутоиммунных заболеваний; • интенсивное курение; • иммуносупрессивная терапия и терапия стероидами.
Т-"натуральные киллеры", НК-Т (CD3+CD56+CD45+)	• Длительные хронические воспалительные процессы; • тяжелое течение воспали­тельных процессов; • длительная персистенция антигена в организме.	Не имеет диагнос­тического значения.
B-1–клетки (CD19+CD5+CD27-CD45+)	• Аутоиммунная патология (системная красная волчанка, ревматоидный артрит, аутоиммунный тиреоидит, неспецифический язвенный колит, миастения); • аутоиммунные поражения при инфекционных заболеваниях (хламидиоз, синдром Рейтера, бруцеллез и т.д.); • лимфопролиферативные процессы.	Не имеет диагнос­тического значения.
T-reg. (регуляторные Т-клетки (CD4+CD25brightCD127negCD45+)	• Различные новообразования; • лимфопролиферативные процессы; • инфекционные заболевания.	• Аутоиммунная патология (сахарный диабет 1-го типа, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, аутоиммунный тиреоидит, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, миастения); • аллергические заболевания (бронхиальная астма, атопический дерматит, пищевая аллергия).

В совокупности с клиническими данными, симптоматикой, другими методами лабораторных исследований вышеуказанные изменения являются диагностическим признаком возникновения этих патологических процессов в организме человека.

Важные замечания

• Результаты данного исследования необходимо сопоставлять с клиническими данными и показателями других лабораторных анализов.
• Оценка иммунологического статуса у пациента в динамике существенно повышает клиническую значимость исследования.

Литература

1. Хаитов, Р.М. Аллергология и иммунология : национальное руководство / под ред. Р.М. Хаитова, Н.И. Ильиной. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 656 с.
2. Хаитов, Р.М. Руководство по клинической иммунологии. Диагностика заболеваний иммунной системы : руководство для врачей / Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин, А.А. Ярилин. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 352 с.
3. Зуева Е.Е. Иммунная система, иммунограмма : рекомендации по назначению и применению в лечебно диагностическом процессе /Е.Е Зуева, Е.Б. Русанова, А.В. Куртова, А.П. Рыжак, М.В. горчакова, О.В. Галкина – СПб. – Тверь: ООО "издательство "Триада", 2008. – 60 с.
4. Кетлинский, С.А. Иммунология для врача / С.А. Кетлинский, Н.М. Калинина. СПб. : Гиппократ, 1998. – 156 с. Ярилин, А.А. Иммунология : учебник / А.А. Ярилин. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2010. – 752 с.
5. Хаитов, Р.М. Иммунология : атлас / Р.М. Хаитов, А.А. Ярилин, Б.В. Пинегин.М. : ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 624 с.
6. Хаитов, Р.М. Иммунология : учебник / Р.М. Хаитов. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 320 с.
7. Хаитов, Р.М. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии / Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. – 2001. – N4. – С. 4 – 6.
8. Whiteside, T.L. Role of Human Natural Killer Cells in Health and disease / T.L. Whiteside, R.B. Herberman // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. – 1994. – Vol. 1, №2. – P. 125 – 133.Ginadi, L. Differential expression of T-cell antigens in normal peripheral blood lymphocytes : a quantitative analysis by flow cytometry / L. Ginadi, N. Farahat, E. Matutes [et al.] // J. Clin. Pathol. – 1996. – Vol. 49, № 1. – P. 539 – 544.
9. Merser, J.C. Natural killer T-cells : rapid responders controlling immunity and disease / J.C. Merser, M.J. Ragin, A. August // International J. Biochemistry & Cell Biology. – 2005. – № 37. – P. 1337 – 1343.
10. Никитин, В.Ю. Маркеры активации на Т-хелперах и цитотокси ческих лимфоцитахна различных стадиях хронического вирусного гепатита С / В.Ю. Никитин, И.А. Сухина, В.Н. Цыган [и др.] // Вестн. Рос. Воен.-мед. акад. – 2007. – Т. 17, № 1. – С. 65 – 71.
11. Boettler, T. T cells with CD4⁺CD25⁺ regulatory phenotype suppress in vitro proliferation of virus-specific CD8⁺ T cells during chronic hepatitis C virus infection / T. Boettler, H.C. Spangenberg, C. Neumann-Haefelin [et al.] // J. Virology. − 2005. − _Vol. 79, N 12. −P. 7860 – 7867.
12. Ormandy, L.A. Increased Populations of Regulatory T Cells in Peripheral Blood of Patients with Hepatocellular Carcinoma / L.A. Ormandy, T. Hillemann, H. Wedemeyer [et al.] // J. Cancer Res. − 2005. − _Vol. 65, N 6. − P. 2457 – 2464.
13. Sakaguchi, S. Naturally arising FoxP3-expressing CD4⁺CD25⁺ regulatory T cells in immunological tolerance to self- and non-self / S. Sakaguchi // Nature Immunol. − 2005. −Vol. 6, N 4. − P. 345 – 352.
14. Romagnani, S. Regulation of the T cell response / S. Romagnani // Clin. Exp. Allergy. – 2006. − _Vol. 36. − P. 1357 – 1366.
15. Хайдуков С.В., Основные и малые популяции лимфоцитов периферической крови человека  и их нормативные значения  (метод многоцветного цитометрического анализа) /Хайдуков С.В., Зурочка А.В., Тотолян А.А., Черешнев В.А.  // Мед. иммунология. – 2009. -Т. 11 (2-3). – С. 227-238.