Свиной грипп (Influenza virus A/H1N1, sw2009), РНК [реал-тайм ПЦР]

Свиной грипп – это несколько подтипов вируса гриппа А, способных вызывать заболевание у свиней. Наиболее актуальным в плане эпидемиологической настороженности в настоящее время является подтип А/H1N1.

Так как серотипы и подтипы вируса гриппа отличаются друг от друга по некоторым генетическим последовательностям (например, по гену белка гемагглютинина, H1), с помощью исследования РТ-ПЦР возможно идентифицировать конкретный подтип вируса (Influenza A/H1).

Синонимы английские

Swine influenza virus, SIV, pH1/N1, pndH1/N1, H1N1v, (swine flu, swine influenza, 2009 flu pandemic), RNA [real-time polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокроту.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Рекомендуется употребить большой объем жидкости (чистой негазированной воды) за 8-12 часов до сбора мокроты.
• За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.
• Не принимать пищу в течение 1–2 часов до исследования.
• Не принимать пищу, не пить и не полоскать горло в течение 2-3 часов до исследования.
• Сбор биоматериала рекомендуется проводить утром. Для исследования необходимо собирать свободно отделяемую мокроту, полученную в процессе глубокого откашливания. В контейнер не должны попадать слюна и отделяемое носоглотки! Это может привести к искажению результатов.

Общая информация об исследовании

Influenza virus A/H1 – один из подтипов вируса гриппа, характеризующийся особой вирулентностью и приводящий к тяжелым формам заболевания и пандемиям. Грипп, вызванный Influenza virus A/H1 (грипп свиней, свиной грипп), отличается от сезонного (эпидемического) гриппа по нескольким характеристикам. Во-первых, возбудитель гриппа свиней – это новый вариант вируса гриппа, возникший в организме свиней в результате мутаций его генетического материала и затем распространившийся в популяции человека. Большинство людей не имеют иммунитета к нему, поэтому заболевание характеризуется очень высокой заразностью. Кроме того, оно чаще протекает в более тяжелой форме с вовлечением нижних отделов респираторного тракта и с осложнениями (в виде пневмонии, дыхательной и почечной недостаточности, энцефалопатии и др.), что обуславливает необходимость раннего и интенсивного лечения. Поэтому диагностика гриппа свиней должна быть произведена в кратчайшие сроки. На основании опыта борьбы с пандемией гриппа Influenza A H1/N1 в 2009 году был сделан вывод, что "золотым стандартом" идентификации этого подтипа вируса является полимеразная цепная реакция в режиме реального времени –  метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в отделяемом носоглотки) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Такое исследование позволяет получить максимально точный результат в кратчайшие сроки.

РТ-ПЦР относится к так называемым быстрым методам диагностики гриппа, обеспечивающим возможность постановки окончательного, лабораторно подтвержденного диагноза еще до начала лечения. Это преимущество отличает РТ-ПЦР от выделения вируса в культуре клеток (требует 7-10 дней) и большинства серологических методов (требуют нарастания титра антител, 10-14 дней).

Так как серотипы и подтипы вируса гриппа отличаются друг от друга по некоторым генетическим последовательностям (например, по гену белка гемагглютинина, H1), с помощью исследования РТ-ПЦР возможно идентифицировать конкретный подтип вируса (Influenza A/H1). Специфичность этого анализа составляет 98-100 %. Среди "быстрых" тестов только РТ-ПЦР способна дифференцировать подтип вируса гриппа свиней от других подтипов Influenza A. Положительный результат исследования указывает на наличие генетического материала Influenza A/H1 в образце, однако не всегда означает продолжающуюся репликацию вируса, так как в реакции определяется не сам вирус, а фрагменты его РНК. По этой же причине положительный результат исследования биоматериала, взятого на фоне начатого противовирусного лечения, не означает его неэффективность.

Чувствительность исследования составляет 86-100 %. Это самый высокий показатель среди других "быстрых" диагностических тестов. Например, чувствительность экспресс-тестов для определения антигена вируса гриппа в отношении Influenza H1/N1 составляет 10-70  %, а чувствительность прямого и непрямого метода иммунофлюоресценции – 47-93 %. Важно отметить, что несмотря на это возможность ложноотрицательного результата все же существует. В отличие от большинства других лабораторных методов, результат РТ-ПЦР в меньшей степени зависит от распространенности гриппа среди населения, однако необходимо помнить, что частота ложноотрицательных результатов выше в период эпидемии. Для более точной постановки диагноза рекомендуется повторное (многократное) исследование образцов разных биоматериалов (отделяемого носоглотки, ротоглотки, мокроты) с интервалом 48-72 часа. Причем отрицательный результат РТ-ПЦР полностью не исключает диагноза "грипп Influenza A/H1" и не препятствует назначению противовирусной терапии.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики Influenza A/H1–гриппа.

Когда назначается исследование?

• При постановке диагноза "грипп, среднетяжелая/тяжелая форма" и при осложнениях гриппа (пневмония, дыхательная недостаточность, энцефалопатия и др.).
• При постановке диагноза "грипп" у пациента с факторами риска гриппа Influenza A/H1: возраст до 2 лет и старше 65 лет, беременность, хроническая обструктивная болезнь легких, хронические заболевания сердца, почек, печени, сахарный диабет, иммуносупрессия.
• При отсутствии улучшения или при ухудшении состояния в течение 72 часов после постановки диагноза "грипп, легкая форма" у пациента без факторов риска Influenza A/H1.
• При обследовании пациента, контактировавшего с больным с установленной Influenza A/H1–инфекцией.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

• Influenza A/H1–инфекция.

Причины отрицательного результата:

• отсутствие Influenza A/H1–инфекции.

Важные замечания

• Оптимально брать биоматериал через 48-72 часа после начала заболевания. Несмотря на то что идентификация вируса гриппа с помощью РТ-ПЦР возможна в течение более длительного времени от начала заболевания по сравнению с большинством других тестов, биоматериал должен быть получен как можно раньше. У детей, а также при вовлечении нижних отделов респираторного тракта этот период более длительный.
• Отрицательный результат не препятствует назначению противовирусной терапии.
• Положительный результат исследования биоматериала, взятого на фоне начатого противовирусного лечения, не означает его неэффективность.

Также рекомендуется

• Общий анализ крови
• Лейкоцитарная формула
• С-реактивный белок, количественно
• Mycoplasma pneumoniae, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Adenovirus, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Adenovirus, иммунофлюоресценция
• Streptococcus pneumoniae, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Streptococcus pyogenes, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Кто назначает исследование?

Инфекционист, эпидемиолог, педиатр, врач общей практики, анестезиолог-реаниматолог.

Литература

• Li K, Xiao L, Liu C, Zhang J, Sirois P. Transforming viral sequences to A (H1N1) flu diagnosis: the current status and future prospects of rtPCR based assays. Curr Pharm Biotechnol. 2010 Jan;11(1):113-6.
• Kamps B. S, Hoffmann C, Preiser W. Influenza Report 2006 / B. S. Kamps, С. Hoffmann, W. Preiser W. – Flying Publisher, 2006.
• WHO Global Influenza Surveillance Network. Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza. – World Health Organization, 2011.
• WHO World Health Organization. Clinical management of human infection with pandemic (H1N1) 2009: revised guidance. – World Health Organization, 2009.