FISH-анализ перестроек 3q

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) – цитогенетический метод исследования, в процессе которого детектируется наличие и локализация специфических ДНК-последовательностей на хромосомах. На длинном плече третьей хромосомы расположены гены, отвечающие за регуляцию процессов внутриклеточного сигналинга, апоптоза и межклеточного взаимодействия. Все эти процессы крайне важны для нормального развития и функционирования клеток кроветворной системы. Любые аномалии этой хромосомы – делеции или перестройки – сопровождаются развитием миелодиспластического синдрома с неблагоприятным течением и острого миелобластного лейкоза. Исследование применяется для диагностики и оценки прогноза течения заболевания.

Синонимы русские

Флуоресцентная гибридизация in situ, молекулярная диагностика онкогематологических заболеваний: миелодиспластического синдрома с неблагоприятным течением или острого миелобластного лейкоза.

Синонимы английские

Fluorescent in situ hybridization, molecular diagnostics of oncohematological diseases: myelodysplastic syndrome with an unfavorable course or acute myeloid leukemia.

Метод исследования

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Костный мозг.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить (по согласованию с врачом) прием антибактериальных и химиотерапевтических препаратов в течение 14 дней до исследования.
• Исследование рекомендуется проводить не ранее чем через 2 недели после перенесенных инфекционных / острых воспалительных заболеваний.

Преимущества исследования

• Является чувствительным методом для идентификации хромосомных аберраций при количествах лейкозных клеток менее 10⁹, обеспечивая при этом быстрый анализ большого (> 500) числа клеток. Метод обладает высокой точностью для идентификации неизвестных фрагментов хромосомной ДНК.
• Исследование FISH может быть применено как к метафазным, так и к интерфазным ядрам, то есть к неделящимся клеткам.
• Позволяет определить даже самые небольшие генетические аномалии, которые нельзя рассмотреть при помощи обычного микроскопа и стандартных окрасок.

Общая информация об исследовании

Анализ с помощью флюоресцентной in situ гибридизации (fluorescence in situ hybridization, FISH) – молекулярно‐цитогенетический метод для идентификации генетических аберраций (отклонений от нормы). Изначально данный метод использовался как исследовательский для выявления специфической ДНК-последовательности в хромосомах, но благодаря прогностической и предсказательной ценности был внедрен в клиническую практику.

Метод основан на использовании флуоресцентно-меченых ДНК-зондов, которые представляют собой искусственно синтезированные фрагменты ДНК (олигонуклеотиды), последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. ДНК-зонды различаются по специфичности – для каждой хромосомной аномалии используются свои ДНК-зонды. Также зонды различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие – к конкретному локусу (фрагменту хромосомы или гена).

После специальной процедуры – денатурации молекула ДНК приобретает вид одноцепочечной нити. ДНК-зонд гибридизуется (связывается) с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа. Данное состояние интерпретируется как положительный результат FISH-теста. При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-зонды в ходе реакции "отмываются", что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет не только выявить флуоресцентный сигнал, но и определить его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест – это еще и количественный анализ.

FISH имеет широкие возможности в клинической онкологии для обнаружения хромосомных аномалий в опухолевых клетках. Исследование определяет генетический состав клетки как во время митоза, так и в интерфазе. FISH имеет высокую чувствительность – позволяет обнаружить индивидуальные гены, кроме того, в одном препарате может быть использовано несколько зондов с различными красителями.

FISH-анализ широко применяется при лимфопролиферативных заболеваниях, являясь в ряде случаев определяющим фактором для подтверждения диагноза.

Миелодиспластический синдром (МДС) представляет собой группу миелоидных заболеваний, характеризующихся дефектом костномозгового кроветворения, цитопенией и рецидивирующими цитогенетическими нарушениями. У таких пациентов имеется переменный риск прогрессирования патологии в острый миелобластный лейкоз (ОМЛ). Хромосомные перестройки длинного плеча 3-й хромосомы (3q21 и 3q26) есть в 1-2 % всех случаев острого миелобластного лейкоза и миелодиспластического синдрома. У пациентов с ОМЛ и МДС с хромосомными перестройками между 3q21 и 3q26 регионами хромосомы плохой прогноз течения заболевания. Хотя бласты в костном мозге пациентов с ОМЛ с перестройкой морфологически гетерогенны, у 7-22 % пациентов с ОМЛ с перестройкой наблюдалась выраженная тромбоцитемия. Это указывает на тот факт, что в области перестройки 3q расположены гены, связанные с созреванием мегакариоцитов или выработкой тромбоцитов.

Для чего используется исследование?

• Для уточнения диагноза при подозрении на миелодиспластический синдром или острый миелобластный лейкоз.
• Для повторного консультирования при подозрении на злокачественное заболевание крови.
• Для выбора тактики лечения и прогноза заболевания, которые зависят от хромосомного состава опухоли.
• Чтобы определить наличие или отсутствие конкретной хромосомной аберрации.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на злокачественное заболевание крови, для выбора тактики лечения и оценки прогноза, который зависит от хромосомного состава опухоли.
• Для подтверждения диагноза при клинических предпосылках: клиническая картина заболевания, изменения гемограммы, наличие специфических синдромов.
• Для контроля "минимальной остаточной болезни" после химиотерапии или пересадки костного мозга.

Кто назначает исследование?

Гематолог, онколог.

Также рекомендуется:

[02-043] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)

[02-027] Ретикулоциты

[16-012] Цитогенетический анализ клеток костного мозга (кариотип)

[18-113] FISH-анализ делеции 12p

[18-114] FISH-анализ делеций 20q

[18-118] FISH-анализ перестроек 5-й хромосомы

[18-119] FISH-анализ перестроек 7-й хромосомы

[18-123] FISH-анализ перестроек MLL-гена

Литература

• Suzuki M, Katayama S, Yamamoto M. Two effects of GATA2 enhancer repositioning by 3q chromosomal rearrangements. IUBMB Life. 2020 Jan;72(1):159-169.
• Lawce H, Szabo E, Torimaru Y. MECOM (EVI1) Rearrangements: A Review and Case Report of Two MDS Patients with Complex 3q Inversion/Deletions. J Assoc Genet Technol. 2017;43(1):9-14.
• Nomdedeu M, Calvo X, Pereira A. Spanish Group of Myelodysplastic Syndromes. Prognostic impact of chromosomal translocations in myelodysplastic syndromes and chronic myelomonocytic leukemia patients. A study by the spanish group of myelodysplastic syndromes. Genes Chromosomes Cancer. 2016 Apr;55(4):322-7.