FISH-анализ перестроек 7-й хромосомы

Флуоресцентная гибридизация insitu (FISH) – цитогенетический метод исследования, в процессе которого детектируется наличие и локализация специфических ДНК-последовательностей на хромосомах. 7-я хромосома в своем составе имеет гены, отвечающие за регуляцию процессов клеточной дифференцировки кроветворной системы. Любые аномалии этой хромосомы – делеции или перестройки – сопровождаются развитием миелодиспластического синдрома с неблагоприятным течением или острого миелобластного лейкоза. Исследование применяется для диагностики и оценки прогноза течения заболевания.

Синонимы русские

Флуоресцентная гибридизация in situ, молекулярная диагностика онкогематологических заболеваний: миелодиспластического синдрома с неблагоприятным течением или острого миелобластного лейкоза.

Синонимы английские

Fluorescent in situ hybridization, molecular diagnostics of oncohematological diseases: myelodysplastic syndrome with an unfavorable course or acute myeloid leukemia.

Метод исследования

Флуоресцентная гибридизация in situ.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Костный мозг.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить (по согласованию с врачом) прием антибактериальных и химиотерапевтических препаратов в течение 14 дней до исследования.
• Исследование рекомендуется проводить не ранее чем через 2 недели после перенесенных инфекционных/острых воспалительных заболеваний.

Преимущества исследования

• Является чувствительным методом для идентификации хромосомных аберраций при количествах лейкозных клеток менее 10⁹ , обеспечивая при этом быстрый анализ большого (> 500) числа клеток. Метод обладает высокой точностью для идентификации неизвестных фрагментов хромосомной ДНК.
• Исследование FISH может быть применено как к метафазным, так и к интерфазным ядрам, то есть к неделящимся клеткам.
• Позволяет определить даже самые небольшие генетические аномалии, которые нельзя рассмотреть при помощи обычного микроскопа и стандартных окрасок.

Общая информация об исследовании

Анализ с помощью флюоресцентной in situ гибридизации (fluorescence in situ hybridization, FISH) – молекулярно‐цитогенетический метод для идентификации генетических аберраций (отклонений от нормы). Изначально данный метод использовался как исследовательский для выявления специфической ДНК-последовательности в хромосомах, но благодаря прогностической и предсказательной ценности был внедрен в клиническую практику.

Метод основан на использовании флуоресцентно-меченых ДНК-зондов, которые представляют собой искусственно синтезированные фрагменты ДНК (олигонуклеотиды), последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. ДНК-зонды различаются по специфичности – для каждой хромосомной аномалии используются свои ДНК-зонды. Также зонды различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие – к конкретному локусу (фрагменту хромосомы или гена).

После специальной процедуры – денатурации молекула ДНК приобретает вид одноцепочечной нити. ДНК-зонд гибридизуется (связывается) с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа. Данное состояние интерпретируется как положительный результат FISH-теста. При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-зонды в ходе реакции "отмываются", что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет оценить не только наличие флуоресцентного сигнала, но и его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест – это еще и количественный метод.

FISH имеет широкие возможности в клинической онкологии для обнаружения хромосомных аномалий в опухолевых клетках. Исследование определяет генетический состав клетки как во время митоза, так и в интерфазе. FISH имеет высокую чувствительность – позволяет обнаружить индивидуальные гены, кроме того, в одном препарате может быть использовано несколько зондов с различными красителями.

FISH-анализ широко применяется при лимфопролиферативных заболеваниях, являясь в ряде случаев определяющим фактором для подтверждения диагноза.

Миелодиспластический синдром (МДС) представляет собой гетерогенную группу миелоидных заболеваний, характеризующихся дефектом костномозгового кроветворения, которые вызывают периферические цитопении, рецидивирующие цитогенетические нарушения и переменный риск прогрессирования в острый миелоидный лейкоз (ОМЛ). Потеря материала хромосомы 7 либо в виде полной потери одной хромосомы (моносомия 7, -7), либо в виде делеции ее длинного плеча [del (7q)] – одна из наиболее частых хромосомных аномалий при миелоидных злокачественных новообразованиях, таких как миелодиспластический синдром и острый миелобластный лейкоз (ОМЛ), поскольку они встречаются в 10-20 % их случаев. Они чаще наблюдаются у пожилых пациентов, но также поражаются дети и подростки. Делеции 7q различаются по длине и обычно встречаются в области между 7q22 и 7q36. Аномалии межфазной хромосомы 7 in situ могут быть обнаружены с помощью обычного цитогенетического анализа или флуоресцентной гибридизации (FISH). Это исследование обладает большей чувствительностью по сравнению с традиционной цитогенетикой для выявления -7 и del(7q) у пациентов с миелоидными злокачественными новообразованиями. Повторяющаяся потеря материала хромосомы 7 убедительно свидетельствует о существовании одного или нескольких генов-супрессоров опухолей (TSGs) в этом регионе. Функциональные потери таких генов способствуют инициации и/или прогрессированию заболевания. Международная прогностическая система оценки (IPSS) МДС пациентов с ремиссией с -7 и пациентов с del (7q) рассматривает вместе как одну цитогенетическую подгруппу с плохим прогнозом и сниженной общей выживаемостью.

Для чего используется исследование?

• Для уточнения диагноза при подозрении на миелодиспластический синдром или острый миелобластный лейкоз.
• Для повторного консультирования при подозрении на злокачественное заболевание крови.
• Для выбора тактики лечения и прогноза заболевания, которые зависят от хромосомного состава опухоли.
• Чтобы определить наличие или отсутствие конкретной хромосомной аберрации.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на злокачественное заболевание крови, для выбора тактики лечения и оценки прогноза, который зависит от хромосомного состава опухоли.
• Для подтверждения диагноза при наличии клинических предпосылок: клиническая картина заболевания, изменения гемограммы, наличие специфических синдромов.
• Для контроля "минимальной остаточной болезни" после химиотерапии или пересадки костного мозга.

Кто назначает исследование?

Гематолог, онколог.

Также рекомендуется

• [02-043] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)
• [02-027] Ретикулоциты
• [16-012] Цитогенетический анализ клеток костного мозга (кариотип)
• [18-113] FISH-анализ делеции 12p
• [18-114] FISH-анализ делеций 20q
• [18-117] FISH анализ перестроек 3q
• [18-118] FISH-анализ перестроек 7-й хромосомы
• [18-123] FISH-анализ перестроек MLL-гена

Литература

• Cordoba I, González-Porras JR, Nomdedeu B. Spanish Myelodysplastic Syndrome Registry. Better prognosis for patients with del(7q) than for patients with monosomy 7 in myelodysplastic syndrome. Cancer. 2012 Jan 1;118(1):127-33.
• El-Menoufy MAM, Mourad ZI, Farahat NM. The prognostic impact of loss of chromosome 7 material detected by fluorescence in situ hybridization (FISH) in myeloid malignancies. J Egypt Natl Canc Inst. 2018 Dec;30(4):133-138.
• Zhang R, Kim YM, Wang X. Genomic Copy Number Variations in the Myelodysplastic Syndrome and Acute Myeloid Leukemia Patients with del(5q) and/or -7/del(7q). Int J Med Sci. 2015 Sep 1;12(9):719-26.