Иммунологическое обследование при аутоиммунных заболеваниях

Иммунограмма. Данный вариант исследования, помимо оценки основных субпопуляций лимфоцитов, уровня циркулирующих иммунных комплексов и основных классов иммуноглобулинов, включает в себя более углубленный анализ малых популяций В-лимфоцитов. Это В-1 клетки (популяция, связанная с продукцией аутоантител), В-клетки памяти, а также Т-регуляторные клетки. Анализ этих клеток в совокупности с основными субпопуляциями лимфоцитов позволяет определить выраженность аутоиммунного компонента в течение заболевания, в динамике оценить эффективность проводимой иммуносупрессивной и противовоспалительной терапии.

* Результаты исследования выдаются с заключением врача – аллерголога-иммунолога, доктора медицинских наук.

Набор тестов:

Лейкоцитарная формула (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)
Суммарные иммуноглобулины класса A в сыворотке (IgA)
Суммарные иммуноглобулины класса G в сыворотке (IgG)
Суммарные иммуноглобулины класса M в сыворотке (IgM)
Состояние клеточного звена иммунитета
Углубленный анализ малых популяций B-клеток
Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)

Синонимы русские

Иммунограмма, иммунофенотипирование, клеточный иммунитет, многоцветный клеточный анализ методом проточной цитометрии.

Синонимы английские

Human Immune System, Immunophenotyping, Multicolor Flow Cytometry Cell Analysis, Human Leukocyte Differentiation Antigens.

Метод исследования

Проточная цитометрия, иммунотурбидиметрия, ИФА.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как подготовиться к исследованию?

Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования.
Полностью исключить прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием (по согласованию с врачом).
Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 24 часов до исследования.
Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

В современном понимании иммунный статус человека – это совокупность лабораторных показателей, характеризующих количественную и функциональную активность клеток иммунной системы в данный момент времени. Оценка иммунного статуса проводится с помощью иммунологического лабораторного обследования – иммунограммы. Иммунограмма крови не отражает избирательно состояние патологически измененного органа или системы, но позволяет оценить иммунную систему в целом (суммарный эффект изменения активности иммунной системы в ответ на чужеродный антиген).

Определение клеточного состава (иммунофенотипирование) лимфоцитов крови – основной компонент в оценке иммунного статуса – выполняется методом проточной цитофлюориметрии.

Иммунофенотипирование – это характеристика клеток, полученная при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.

Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD-антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития.

CD-антигены (англ. cluster of differentiation antigens) – это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флюоресцентномеченые моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии рассчитать содержание лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.

В основе проточной цитофлюориметрии лежит фотометрическое и флюоресцентное измерение отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.

Метод позволяет не только определить количественное соотношение основных популяций лимфоцитов –

Т-лимфоциты (CD3⁺CD19^-),
Т-хелперы/индукторы (CD3⁺CD4⁺CD45⁺),
Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) (CD3⁺CD8⁺CD45⁺),
истинные натуральные "киллеры" (NK-клетки) (CD3^-CD56⁺CD45⁺),
В-лимфоциты (CD19⁺CD3^-), –

но и оценить малые клеточные популяции, а также изучить их функциональную активность:

Т-лимфоциты, экспрессирующие маркеры NK-клеток (Т-NK-клетки) (CD3⁺CD56⁺CD45⁺),
NK-клетки, экспрессирующие альфа-цепь антигена CD8 (CD3^-СD8⁺CD45⁺),
В-1–клетки (CD19⁺CD5⁺CD27^-CD45⁺), связанные с продукцией аутоантител,
активированные В-лимфоциты (CD3^-CD25⁺CD45⁺),
В-2-клетки (CD19⁺CD5^-CD27^-CD45⁺),
В-клетки памяти (CD19⁺CD5^-CD27⁺CD45⁺),
активированные Т-лимфоциты (CD3⁺HLA-DR⁺CD45⁺) и активированные цитотоксические лимфоциты (CD8⁺HLA-DR⁺CD45⁺),
В-лимфоциты и активированные NK-клетки (CD3^-HLA-DR⁺CD45⁺),
активированные Т-лимфоциты, экспрессирующие альфа-цепь рецептора ИЛ-2 (CD3⁺CD25⁺CD45⁺),
регуляторные Т-хелперные клетки (CD4⁺CD25^brightCD127^negCD45⁺), выполняющие иммуносупрессорную функцию.

Такое всестороннее изучение клеточного состава лимфоцитов в совокупности с результатами других тестов, входящих в состав исследования, позволяет установить более тонкие механизмы иммунологических нарушений, уточнить степень и глубину поражения иммунной системы и подобрать препарат для последующей адекватной иммунокорректирующей терапии, оценки эффективности проводимого лечения, определения прогноза заболевания.

Когда назначается исследование?

Исследование рекомендовано для комплексного обследования пациентов, входящих в группу риска по аутоиммунным и иммунопатологическим синдромам:

ревматоидный артрит;
рассеянный склероз;
диффузные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, дерматомиозит);
аутоиммунный тиреоидит;
неспецифический язвенный колит и т.д.

Что означают результаты?

Уровень различных клеточных популяций лимфоцитов может повышаться или понижаться при различных патологических процессах в организме, таких как инфекции, аутоиммунные и онкологические заболевания, иммунодефициты, в постоперационном периоде, при трансплантации органов.

Ниже представлена таблица с клиническими ситуациями, которые могут приводить к изменениям в субпопуляционном составе лимфоцитов.

Субпопуляция лимфоцитов	Повышение показателя	Снижение показателя
T-лимфоциты (CD3⁺CD19^-)	- Острые и хронические инфекции - Гормональный дисбаланс - Длительный прием лекарственных препаратов (особенно монотерапия) - Прием биологически активных добавок - Интенсивные занятия спортом - Беременность - T-клеточные лейкозы	- Некоторые виды инфекций - Иммунодефицит-ные состояния - Алкогольный цир-роз печени - Карцинома печени - Аутоиммунные за-болевания - Прием иммуносу-прессивных препаратов
T-хелперы (CD3⁺CD4⁺CD45⁺)	- Ряд аутоиммунных заболеваний - Гормональный дисбаланс - Некоторые инфекции - Отдельные T-клеточные инфекции - Отравление солями бериллия	- Иммунодефицитн. состояния (основной лабораторный признак вторичного иммунодефицита) - Алкогольная болезнь печени - Аутоиммунные заболевания - Прием иммуносупрессивных препаратов или прием стероидов
T-цитотоксические лимфоциты (CD3⁺CD8⁺CD45⁺)	- Некоторые вирусные инфекции - Ряд T-клеточных лимфозов - Наркоз - Острая фаза аллергии - Ряд аутоиммунных патологий	- Некоторые виды аутоиммунных, аллергических заболеваний - Иммуносупрессив-ная терапия
Активированные T-лимфоциты (CD3⁺HLA-DR⁺CD45⁺)	- Инфекции - Аутоиммунная патология - Аллергия - Онкологические заболевания - Алкогольный цирроз печени - Беременность	Не имеет диагностического значения
B-лимфоциты (CD19⁺CD3^-)	- Ряд аутоиммунных патологий - Стресс - B-клеточные лимфомы - Длительное воздействие формальдегида	Гипореактивность, перераспределение B-лимфоцитов в очаги воспаления
Натуральные "киллеры" (CD3^-CD56⁺CD45⁺), (CD3^-CD16⁺CD45⁺)	- Фаза восстановления после вирусных инфекций (гепатит B, C) - Ряд аутоиммунных заболеваний - Онкологические заболевания - Беременность - Алкогольный цирроз печени	- Ряд инфекций - Ряд аутоиммунных заболеваний - Курение - Иммуносупрессив-ная терапия и терапия стероидами
T-натуральные "киллеры", НК-Т (CD3⁺CD56⁺CD45⁺)	- Длительные хронические воспалительные процессы - Тяжелое течение воспалительных процессов - Длительная персистенция антигена в организме	Не имеет диагностического значения
B-1–клетки (CD19⁺CD5⁺CD27^-CD45⁺)	- Аутоиммунная патология (системная красная волчанка, ревматоидный артрит, аутоиммунный тиреоидит, неспецифический язвенный колит, миастения) - Аутоиммунные поражения при инфекционных заболеваниях (хламидиоз, синдром Рейтера, бруцеллез) - Лимфопро-лиферативные процессы	Не имеет диагностического значения
T-reg. (регуляторные T-клетки (CD4⁺CD25^brightCD127^negCD45⁺)	- Различные новообразования - Лимфопроли-феративные процессы - Инфекционные заболевания	- Аутоиммунная патология (сахарный диабет 1-го типа, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, аутоиммунный тиреоидит, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, миастения) - Аллергические заболевания (бронхиальная астма, атопический дерматит, пищевая аллергия)

К каждой иммунограмме прилагается письменное заключение врача-иммунолога.

Важные замечания

Для диагностики патологий результаты этого исследования необходимо сопоставлять с клиническими данными и показателями других лабораторных анализов. Также следует отметить, что клиническую значимость исследования существенно повышает оценка иммунологического статуса пациента в динамике.

Литература

Хаитов, Р. М. Аллергология и иммунология : национальное руководство / под ред. Р. М. Хаитова, Н. И. Ильиной. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 656 с.
Хаитов, Р. М. Руководство по клинической иммунологии. Диагностика заболеваний иммунной системы : руководство для врачей / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин, А. А. Ярилин. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 352 с.
Зуева Е. Е. Иммунная система, иммунограмма : рекомендации по назначению и применению в лечебно диагностическом процессе / Е. Е Зуева, Е. Б. Русанова, А. В. Куртова, А. П. Рыжак, М. В. Горчакова, О. В. Галкина – СПб. – Тверь: ООО "Издательство "Триада", 2008. – 60 с.
Кетлинский, С. А. Иммунология для врача / С. А. Кетлинский, Н. М. Калинина. СПб. : Гиппократ, 1998. – 156 с. Ярилин, А. А . Иммунология : учебник / А. А. Ярилин. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2010. – 752 с.
Хаитов, Р. М. Иммунология : атлас / Р. М. Хаитов, А. А. Ярилин, Б. В. Пинегин.М. : ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 624 с.
Хаитов, Р. М. Иммунология : учебник / Р.М. Хаитов. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 320 с.
Хаитов, Р. М. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин // Иммунология. – 2001. – N4. – С. 4-6.
Whiteside, T. L. Role of Human Natural Killer Cells in Health and disease / T. L. Whiteside, R. B. Herberman // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. – 1994. – Vol. 1, №2. – P. 125-133.
Ginadi, L. Differential expression of T-cell antigens in normal peripheral blood lymphocytes : a quantitative analysis by flow cytometry / L. Ginadi, N. Farahat, E. Matutes [et al.] // J. Clin. Pathol. – 1996. – Vol. 49, № 1. – P. 539-544.
Merser, J.C. Natural killer T-cells : rapid responders controlling immunity and disease / J.C. Merser, M.J. Ragin, A. August // International J. Biochemistry & Cell Biology. – 2005. – № 37. – P. 1337-1343.
Никитин, В. Ю. Маркеры активации на Т-хелперах и цитотоксических лимфоцитах на различных стадиях хронического вирусного гепатита С / В. Ю. Никитин, И. А. Сухина, В. Н. Цыган [и др.] // Вестн. Рос. Воен.-мед. акад. – 2007. – Т. 17, № 1. – С. 65-71.
Boettler, T. T cells with CD4⁺CD25⁺ regulatory phenotype suppress in vitro proliferation of virus-specific CD8⁺ T cells during chronic hepatitis C virus infection / T. Boettler, H.C. Spangenberg, C. Neumann-Haefelin [et al.] // J. Virology. – 2005. – Vol. 79, N 12. – P. 7860-7867.
Ormandy, L.A. Increased Populations of Regulatory T Cells in Peripheral Blood of Patients with Hepatocellular Carcinoma / L.A. Ormandy, T. Hillemann, H. Wedemeyer [et al.] // J. Cancer Res. – 2005. – Vol. 65, N 6. – P. 2457-2464.
Sakaguchi, S. Naturally arising FoxP3-expressing CD4⁺CD25⁺regulatory T cells in immunological tolerance to self- and non-self / S. Sakaguchi // Nature Immunol. – 2005. – Vol. 6, N 4. – P. 345-352.
Romagnani, S. Regulation of the T cell response / S. Romagnani // Clin. Exp. Allergy. – 2006. – Vol. 36. – P. 1357-1366.
Хайдуков С. В., Основные и малые популяции лимфоцитов периферической крови человека и их нормативные значения (метод многоцветного цитометрического анализа) / Хайдуков С. В., Зурочка А. В., Тотолян А. А., Черешнев В. А. // Мед. иммунология. – 2009. – Т. 11 (2-3). – С. 227-238.